基因治疗-创新多重技术组合严控腺相关病毒（AA...（二）
筛选抗体
检测动态范围
将市售AAV2（1x1013 GC/mL，33.8μg/mL）进行从1：8至1：256的2X倍比稀释，Wes检测VP1/VP2/VP3。
Maurice表征AAV电荷异质性
与所有治疗药物一样，基因疗法，需要表征包装药物的递送载体电荷等。使用全柱成像毛细管等电聚焦电泳法（icIEF）来表征AAV的电荷异质性，可以确保产品的稳定性和一致性。
Maurice兼具CE-SDS和iCIEF双功能。两种功能均入选国家药典。
自发荧光和紫外吸光度比较
Maurice同时兼具紫外吸光度和自发荧光检测通道。与吸收检测相比，自发荧光的灵敏度高3-5倍，可以更好检测出AAV特征性异构体峰。因而自发荧光模式更适合AAV病毒电荷表征。
Intra-assay CV
AAV2和AAV6样品一式四份进样，检测Intra-assay重现性（图2）。结果显示其高重现性：AAV2和AAV6的％RSD分别为3.95％和4.30％（表1）。
Inter-assay CV
AAV6样品三次独立实验，每次实验三次重复，来检测Inter-assay重现性（图3）。％RSD为6.6％（表2）。
变性AAV蛋白电荷表征
AAV病毒蛋白会进行几种翻译后修饰，包括糖基化和脱酰胺作用。应激引起的病毒蛋白脱酰胺作用可能导致载体活性，衣壳装配和转导效率降低1。icIEF方法通常用于监测由唾液酸化，糖基化和脱酰胺作用诱导的单克隆抗体的电荷异质性，因此对AAV病毒蛋白也进行类似的评估。使用一式三份电泳图叠加使用吸光度和自发荧光检测法进行评估，AAV2电荷变异体可以清晰分辨和重现（图4）。
推荐
