台盼蓝(Trypan Blue)染色法技术要点（二）
在下面的小视频中，台盼蓝染料被缓缓加入在室温培养了168小时的Jurkat细胞。大家可以清楚地看到部分细胞被染成蓝色后迅速膨胀和破裂，染色随即变浅，细胞失去形态变成“气球“。整个过程仅几秒钟。
有视频为证，这些“气球“状物体就是死细胞的残骸。但当我们在显微镜下计数时，这些“气球”由于颜色太浅通常不会被计在内，因而导致死细胞的漏数和存活率的高估。研究者们将同样的样本用荧光核酸染料AO/PI或PI染色，并用Cellometer
细胞计数仪检测了所有样本的存活率。
从曲线图中可以看出，台盼蓝染色测得的细胞存活率（蓝色和红色曲线）总是高于荧光染料AO/PI和PI测得的存活率（绿色和紫色曲线）。当存活率高于80%时，台盼蓝和荧光染料测得结果间的差距较小；而当存活率低于80%时，两种方法测的结果间的差距会有显著差距，最高可达30%！因此我们强烈建议对于存活率低于80%的细胞样本应该用荧光染核法（比如AO/PI）检测细胞浓度和存活率[1]。
诱导的瞬间死亡
研究者们将Jurkat细胞分为两份，一份用沸水浴处理15分钟，一份不处理。处理过的细胞被认为0%存活，不处理的细胞被认为100%存活。将这两份细胞按比例混合得到存活率为0，25，50，75和100%的细胞样本。用0.4%台盼蓝或PI（碘化丙啶）荧光染料分别给样本染色并用Cellometer
细胞计数仪计数。
上图是预期存活率为100，50和0%的样本的染色效果。不同于自然死亡的细胞，热水浴诱导的死细胞台盼蓝染色后都变成了深蓝色，形态完整，没有出现“气球“状细胞。
此外，台盼蓝和PI染色测得的细胞存活率高度一致，也和预期存活率相当接近。为什么沸水浴处理的细胞和自然死亡的细胞在台盼蓝染色上会有这么大的区别呢？一个可能的原因是沸水浴增加了细胞膜的通透性但膜依然保持完整，使得台盼蓝可以渗入到死细胞中却不会向外扩散。
根据这些图片、视频和数据，研究者们提出了一个假设：细胞膜通透性增加而依然完整时，台盼蓝可以渗入并留在细胞内，细胞呈深蓝色并具有细胞形态；当细胞膜进一步破损时，渗入的台盼蓝会撑开细胞膜并扩散到周围，形成“气球”状物体，细胞形态随之消失[1]。简言之，此时的死细胞已经”Hold”不住台盼蓝了。
