活性染料-台盼蓝染色的原理和步骤
在高中生物中,用血细胞计数板对酵母菌的计数不能专门计数活细胞,但也有染色试剂专门染色活细胞的,结合计数就可以知道活细胞的数目,如台盼蓝就是一种细胞活性染料。
台盼蓝是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,检测细胞是否存活。分子式:C34H24N6O14S4Na4。
一、台盼蓝染色的原理
台盼蓝可穿透死细胞的细胞膜,使死细胞中的DNA着色,在光学显微镜下可观察到蓝色沉淀,因此可判断此细胞已经死亡,而台盼蓝无法进入活细胞内,故无法使细胞的DNA着色。
二、台盼蓝染色的主要步骤(计数培养的动物细胞为例)
1. 用Hanks液(主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等)配制0.1%台盼蓝溶液。
2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞。
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液。
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度。
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3-5min。
6. 染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置血细胞计数板上,在高倍镜下观察计数。
7. 死细胞着浅蓝色并膨大,无光泽;活细胞不着色并保持正常形态,有光泽。
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目。
9. 统计未染色细胞。
10. 按公式计算出细胞活率:
细胞活率(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100%。
三、注意事项
染色时间不能太长,否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使检测结果偏低。