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华氏补体结合试验的操作方法

2022.11.15

  (1)溶血素滴定:按表1成分、次序、剂量加入各管进行滴定。

  溶血素单位:即能完全溶解红细胞的溶血素最高稀释度,按表1假定结果,1∶2400稀释度(0.1ml)的溶血素为1个单位。如实验时应用2个单位,即1∶l200稀释度(0.1ml)的溶血素溶液。

  (2)补体滴定:将补体稀释成1∶30。按表2成分、次序、剂量加入各管中作滴定,整个试验过程中补体应放在冰水盒中,防止活性下降。

  补体单位:即能发生完全溶血现象的最小补体量。按表2假定结果,1∶30补体0.12ml内含1个单位,则0.24ml含有2个单位。为使0.2ml中含有2个单位,可按下法计算稀释:

  补体作1∶25稀释后,每0.2ml中含有补体2个单位。

  (3)抗原滴定:

  ①将64支试管排方阵,即8行与8排。

  ②先作二倍稀释已灭活(56℃30min)的免疫血清,于第一排1~8各管中加1∶2稀释血清0.1ml,将1∶4稀释血清加至第二排1~8管中,如此二倍递增稀释血清加到第七排。第八排不加血清,以0.1ml盐水代替,作为抗原对照。

  ③同上法稀释抗原,第一行1~8各管中加1∶2稀释抗原0.1ml;第二行中1~8各管中加1∶4。稀释抗原0.1ml,如此,二倍稀释抗原加到第七行,第八行不加抗原,以0.1ml盐水代替,作为血清对照。

  ④在各对照管中补充盐水0.1ml。

  ⑤然后,再于每管中加入2U补体0.2ml,放置4℃冰箱16~18h,次日置37℃水浴箱中30min,各管中加入1.25%绵羊红细胞及溶血素(2U)各0.lml,再放置37℃水浴箱中30min。

  ⑥观察结果:如“4+”表示补体完全被检验系统所固定,呈现全不溶血;“-”表示补体完全未被检验系统固定,呈现完全溶血;在二者之间不同程度

  者则以“3+”、“2+”、“+”、“±”表示之。

  抗原单位:即能与最高稀释倍数的血清呈“3+”反应的抗原最高稀释倍数即为1个抗原单位。如表3所示,1∶8。试验时用2个单位,即1∶4。

  (4)正式试验:

  ①排列试管12支,前8支管加入不同稀释度血清,检查抗体的有无及效价,后4支管作为对照,另取4支管作补体对照。

  ②按表4内容加入各种材料。

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