小鼠超数排卵及附植前不同发育阶段胚胎采集与结构观察
哺乳动物附植前胚胎是胚胎学、发育生物学及动物细胞与胚胎工程的重要研究对象（1）研究哺乳动物的生殖结构（2）对不同发育阶段的干预的影响（3）遗传病的诊断。
显微镜观察法
| 实验方法原理 | 小鼠体内精卵结合形成受精卵的过程是在输卵管壶腹部进行。小鼠第一次卵裂在受精后18～24小时；以后每隔12小时左右分裂一次。根据这一规律，基本上可以推算出早期卵裂胚胎各个时期的时龄，2-细胞为受精后约24～38小时，4-细胞为38～50小时，8-细胞为50～60小时，16-细胞为60～72小时。小鼠胚胎卵裂到8-细胞阶段时开始致密化，致密化的细胞分裂后，形成16-细胞的桑椹胚，在桑椹胚阶段，胚胎由输卵管进入子宫。在16～32细胞期(66～82小时)出现小的囊腔而进入囊胚期。囊胚期可分为四个阶段：16～32细胞期，囊胚腔很小，不易看见，为早期囊胚；有完整的囊胚腔，并能明显区分为内细胞团时为晚期囊胚；囊腔的体积进一步扩大，镜下像一个水泡，内细胞团相对较小的时期为扩张囊胚；扩张囊胚从透明带孵出后则为孵出囊胚，这时透明带并非溶解，而是由于子宫内及滋养层的一些酶使一部分透明带软化，囊胚细胞由软化部位钻出，孵化期的时龄约为96～110小时。通过实验安排的3次胚胎采集和观察时期，可学习到有关哺乳动物早期胚胎发育中的几个知识点。输卵管回收2～4细胞胚，主要观察透明带、极体、卵裂球，了解卵裂机理；输卵管或子宫角回收8细胞胚～桑椹胚，观察致密化过程，了解胚胎致密化现象；子宫回收囊胚，观察透明带、胚内细胞团、滋养层细胞、囊胚腔，了解胚胎细胞的分化现象。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | 电子天平药勺青霉素瓶胶布记号笔注射器针头酒精棉球镊子显微镜擦镜纸恒温水浴锅隔水式恒温培养箱器械盘酒精灯手术剪手术镊子眼科剪眼科镊子眼科异物针表面皿平皿胚胎吸管检卵杯酒精棉球吸管注射器针头针头盒 |
| 实验步骤 | 一、小鼠超排处理日程安排与超排处理
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| 注意事项 | 1. 观察困难时，可提高放大倍数，仔细观察细胞结构。如果卵周隙大，内细胞团细胞松散，细胞大小不一或为很小的一团，细胞界线不清晰，则为退化胚或变性胚。 2. 有时还可以见到一些形态不规则的胚胎。未受精卵无卵周隙，透明带内为一个大细胞，细胞内有较多的颗粒或小泡。 3. 动物胚胎实验是在无菌环境下实验的，其中无菌的液体也是基本要求，配制的液体需要不时的观察颜色是否发生变化，是否浑浊是否有菌落产生。 展开 |
| 其他 | 胚胎形态学质量鉴定可根据以下特征进行： 1. 胚胎的发育阶段和胚胎细胞的形态。 2. 胚胎的形态与匀称性,胚内细胞大小的变化。 3. 胞质的结构及颜色,胚内是否出现空泡、细胞碎片,有无脱出的细胞。 4. 胚胎的大小是否正常。 5. 透明带的形态和完整性。 正常胚胎的发育阶段与回收时应达到的胚龄一致，胚内细胞结构紧凑，胚胎呈球形。胚内细胞间的界线清晰可见，细胞大小均匀，排列规则。透光度一致，既不很亮又不太暗。细胞质中含有一些均匀分布的小泡，没有细颗粒或不规则分布的空泡。有较小的卵周隙，直径规则。透明带完整，无皱纹和萎陷。胚内没有细胞碎片。早期卵裂阶段的胚胎，可明显区分每个卵裂球之间的界限，可观察到单个卵裂球、极体、透明带等结构。致密化的８细胞及桑椹胚可见卵周隙，透明带内为一团细胞，改变反光镜角度，将入射光角度调节适当时，可见胚内细胞间的模糊界线。囊胚阶段的胚胎，主要观察胚内细胞团、滋养层细胞、囊胚腔、卵周隙、透明带等结构。观察时要用异物针拨动胚胎，从不同侧面观察，才能辨明细胞数和胚内结构。 展开 |
