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运用ACQUITY Arc可靠地对肽图分析方法进行转换（一）

2020.5.25

简介

ACQUITY Arc系统能够在同一个平台上运行HPLC和UHPLC分离，是一款可以填补HPLC与UPLC®之间的性能差距的LC平台。利用Arc Multi-flow path™技术，用户可在流路1与流路2之间轻松切换，从而实现无缝的方法转换或改善现有方法。此前的研究表明，ACQUITY Arc系统能够轻松转换单克隆抗体的SEC-HPLC方法1以及CEX-HPLC方法2。这两项研究均采用流路1来模拟HPLC分离，而且两次分析的结果表明系统之间的相对保留时间、峰面积百分比和分离度几乎相同。本应用纪要的目的是展示不同LC平台之间进行肽图分析方法转换的等效性。

肽图分析已成为生物制药行业的一项常规分析，通常采用平台检测的方式进行。肽图可用于表征蛋白质的氨基酸序列，从而对蛋白质进行鉴定以及表征翻译后修饰。在产品的商业转化过程中，肽图常被用于批释放测试或在鉴定完成后用于基因稳定性检测3。肽图并不是一种通用的方法，分析人员必须针对特定的目标蛋白质专门开发分析方法4。为了获得高重现性的肽图，每种分析方法都必须考虑酶解和分离因素，只有这样才能准确评估鉴定结果以及与稳定性、安全性和有效性相关的关键质量属性(CQA)。

由于为特定的蛋白质建立肽图有一定的难度，本应用纪要将一个60分钟的通用平台方法从Agilent 1100系列HPLC转换至ACQUITY Arc系统，并对方法转换过程进行了评估。然后，在两款不同的ACQUITY Arc系统上应用该方法，通过对比所得的结果评估系统之间的差异性。最后，除光学检测技术之外，我们还使用ACQUITY QDa质谱检测器演示了如何将质谱检测技术应用于这类分析。

实验

样品描述

取90 μL 10 mg/mL的英夫利昔单抗，用二硫苏糖醇进行还原处理，并使用碘乙酰胺进行烷基化处理。加入胰蛋白酶酶解样品(酶与底物之比为1:20)，然后在37 °C下水浴18小时，

最后加入纯TFA使胰蛋白酶失活。酶解后样品的最终浓度约为0.4 mg/mL，无需进一步稀释，直接进样分析。

LC条件

LC系统：配备2489 UV/Vis检测器和QDa质谱检测器的ACQUITY Arc系统，流路1

配备四元泵和DAD检测器的Agilent 1100系列HPLC系统

扩充定量环： 100 μL

吸收波长： 214 nm

采样速率： 20 Hz

色谱柱：XBridge BEH C18 130Å,3.5 μm, 4.6 mm x 100 mm (部件号186003033)

XBridge BEH C18 XP 130Å, 2.5 μm, 4.6 mm x 100 mm(部件号186006039)