水体基因组DNA提取试剂盒使用说明
本试剂盒提供了从各种来源的水体样品中快速简便的提取基因组DNA的方法。水体样品中存在大量微生物，这些微生物被作为重要的生态指示剂被广泛应用。从水体中提取高纯度的基因组DNA是水体环境值检测非常重要的手段。水体样品中含有大量的抑制因子如腐殖酸、金属离子等，这些物质即使微量存在于纯化后的DNA中也会对下游反应产生影响，如对PCR、限制性酶切等。因而纯化水体DNA的关键在于如何有效的去除水体中的抑制因子。
采用本公司特有的DNA-only硅胶膜离心柱和溶液配方，搭配Foregene Protease，可以有效的去除水体中各种抑制因子，无需有机溶剂抽提或乙醇及异丙醇沉淀，在40分钟内即可完成对水体样品中DNA的提取操作。
产品特点
无RNA酶污染：无需额外添加RNA酶即可去除基因组DNA中的RNA，避免实验室遭受外源RNA酶污染。
速度快：操作简单，水体基因组DNA提取操作在40分钟内即可完成。
方 便：离心操作均在常温，无需4℃低温离心或乙醇沉淀DNA。
安 全：无需有机试剂抽提。
质量高：提取获得的基因组DNA片段大、无RNA、无RNA酶、离子含量极低，能满足各种实验的要求。
操作步骤
使用前请先在Buffer WB中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1.
使用直径为47mm，孔径为0.22-0.45μm的滤膜对水体样品进行过滤，过滤体积取决于水体样品的浊度和微生物的含量。用剪刀将1/2张或整张过滤后的滤膜尽量剪碎，置于2ml离心管中，以便于后面的裂解步骤。
注意：如果滤膜没有尽量剪碎会影响基因组DNA的产率和纯度。
2. 向离心管中加入1ml Buffer TE、50μl Lysozyme（配制方法见Page 3）充分混匀后，37℃摇床温浴15min（转速：180rpm/min）。
3. 13,300rpm(~17,000×g)离心3min，用移液器吸除上清。
注意：应尽量吸净残留上清，以免影响后续操作。
4.
向留有沉淀的离心管中加入600μl BufferSG1，上下颠倒充分混匀，加入30μl Foregene Protease，30μl
Buffer SG2，上下颠倒充分混匀。 注意：使用前请检查Buffer
SG2是否有沉淀产生，如有沉淀产生，请将溶液置于65℃温育，直至沉淀溶解后使用。
5. 将离心管置于65℃水浴或金属浴5min，中间上下颠倒离心管剧烈晃动混匀一次，时间为5sec，至离心管中的样品无结块，以便和裂解液充分反应。否则，将会影响DNA的产率和纯度。
6. 向离心管中加入 600μl Buffer SG3，上下颠倒充分混匀，置于65℃水浴或金属浴5min，其间上下颠倒充分混匀一次。
7. 13,300rpm(~17,000×g)离心3min，用移液器将上清液转移至新的2ml离心管中，应避免吸到沉淀。
8. 向装有上清液的离心管中加入20μl Buffer SG4，280μl乙醇（96-100%）涡旋充分混匀10s，瞬时离心收集附着在管盖和管壁的液滴。
9. 将离心柱放入收集管中，取800μl混合液加入离心柱中，12,000rpm(~13,400×g)，离心1min。
10. 倒掉收集管中废液，将离心柱放回收集管中，将剩余混合液全部加入离心柱中，12,000rpm(~13,400×g)，离心1min。
11. 倒掉收集管中的废液，将离心柱放回收集管中，向离心柱中加入500μl Buffer PW，12,000rpm(~13,400×g)，离心1min。
12. 倒掉收集管中的废液，将离心柱放回收集管中，向离心柱中加入700μl Buffer WB，12,000rpm(~13,400×g)，离心1min。
13. 重复步骤12一次。14. 倒掉收集管中的废液，将离心柱放回收集管中， 12,000rpm(~13,400×g)离心1min。
15. 将离心柱转移至新的2ml 离心管中，向膜中央悬空滴加50-200μl已于65℃预热的Buffer EB，室温放置5min，12,000rpm(~13,400×g) 离心1min。
注意：如果希望提高DNA的浓度，可将第1次离心得到的溶液重新加回离心柱中，12,000rpm (~13,400×g) 离心1min。
