醋酸去氨加压素的鉴别检查方法
鉴别
(1)取本品约1mg,加水1ml溶解,加双缩脲试剂(取硫酸铜0.15g,加酒石酸钾钠0.6g,加水50ml,搅拌下加入10%氢氧化钠溶液30ml,加水至100m1)1ml,即显蓝紫色。(2)取本品约1mg,加水1ml溶解,加三氯化铁试液数滴,加热煮沸,溶液呈深红色,趁热加入稀盐酸数滴,红色即消失。(3)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致(4)本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致(通则0402)
检查
氨基酸比值取本品10mg,置硬质安瓿瓶中,加6mol/L盐酸溶液3ml,充氮后封口,置110℃水解20小时,冷却,启封,蒸发近干,加水适量使溶解,作为供试品溶液;另取酪氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、脯氨酸、精氨酸及甘氨酸对照品,制成与供试品中各氨基酸相当的浓度,作为对照品溶液。照适宜的氨基酸分析方法测定。以苯丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、精氨酸及甘氨酸的总摩尔数的六分之一作为1,计算各氨基酸的相对比值,天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、精氨酸、苯丙氨酸均应为0.90~1.10,酪氨酸应为0.70~1.05,半胱氨酸应为0.30~1.05。酸度取本品,加水溶解并稀释制成每1ml中含2.5mg的溶液,依法测定(通则0631),pH值应为4.0~7,0溶液的澄清度与颜色取本品,加水溶解并稀释制成每lml中含2.5mg的溶液,依法检查(通则0901第一法和通则0902第一法),溶液应澄清无色醋酸取本品适量,精密称定,加稀释液[流动相A(通则0872)-甲醇(95:5)]溶解并定量稀释制成每1ml中含2mg的溶液,作为供试品溶液。另精密称取醋酸钠对照品适量,照合成多肽中的醋酸测定法(通则0872)测定,含醋酸应为3.0%~8.0%。有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定。供试品溶液取本品适量,加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液对照溶液精密量取供试品溶液1ml,置200m量瓶中用水稀释至刻度,摇匀。系统适用性溶液取醋酸去氨加压素对照品、杂质Ⅰ对照品与缩宫素对照品适量,置同一量瓶中,加水溶解并稀释制成每1ml中各约含20g的混合溶液。灵敏度溶液精密量取对照溶液1ml,置10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸盐溶液(取0.067mol/L磷酸氢二钠溶液与0.067mol/L磷酸氢钾溶液等体积混合,调节pH值至7.0)为流动相A,以乙腈为流动相B,按下表进行梯度洗脱;检测波长为220nm;系统适用性溶液进样体积50μl,其他溶液进样体积1001时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,杂质I、去氨加压素与缩宫素应依次出峰,且各峰间的分离度均应符合要求。灵敏度溶液色谱图中,去氨加压素峰高的信噪比应大于10测定法精密量取供试品溶液与对照溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,杂质Ⅰ峰和单个未知杂质峰面积均不得大于对照溶液主峰面积(0.5%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍(1.5%),小于灵敏度溶液主峰面积的色谱峰忽略不计残留溶剂照残留溶剂测定法(通则0861第一法)测定。供试品溶液取本品约0.1g,精密称定,置顶空瓶中,精密加水1ml使溶解,密封。对照品溶液取乙醚与乙腈各适量,精密称定,加50%二甲基亚砜5ml溶解后,用水定量稀释制成每1m中约含乙醚0.5mg与乙腈0.041mg的混合溶液,精密量取1ml,置顶空瓶中,密封。色谱条件以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷(或极性相近)为固定液的毛细管柱为色谱柱;柱温为60℃;进样口温度为200℃;检测器温度为250℃C;顶空瓶平衡温度为85℃,平衡时间为40分钟。 系统适用性要求对照品溶液色谱图中,乙醚峰与乙腈峰间的分离度应符合要求。测定法取供试品溶液与对照品溶液分别顶空进样,记录色谱图。限度按外标法以峰面积计算,乙醚与乙腈的残留量均应符合规定水分取本品,照水分测定法(通则0832第一法2)测定含水分不得过6.0%细菌内毒素取本品,依法检查(通则1143),每1mg去氨加压素中含内毒素的量应小于500E
