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针对病毒包装五大环节的解决方案

2020.4.29

不论是细胞治疗还是基因治疗都离不开病毒载体。目前使用最多的病毒载体类型包括：腺相关病毒（AAV）、慢病毒（Lv）、逆转录病毒（Rv）和腺病毒（Adv）等，这些常用病毒载体特性如下图所示：

特征	慢病毒 Lentivirus	逆转录病毒 Retrovirus	腺相关病毒 AAV	腺病毒 ADV

基因表达	稳转/瞬转	稳转	瞬转	瞬转
是否能感染可分裂的细胞	是	是	是	是
是否能感染不分裂的细胞	是	是	否	否
是否能整合到靶细胞基因组	是	是	否	否
靶细胞的免疫反应	低	较低	非常低	高
病毒滴度	+++	++	+++	++++
转染效率	+++	++	+++	++++

因此在选择病毒载体时，除了要考虑载体自身特征之外，如何包装并获取高滴度高活性的病毒载体对后续实验至关重要，针对病毒载体制备5大环节，小美为您推荐如下解决方案↓

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1. 病毒载体包装质粒系统
西美杰代理的美国Cell Biolabs公司推出的病毒包装系统可满足多种重组病毒包装需求，包括四大类型病毒包装质粒AAV Helper Free System、ViraSafe™ Lentivirus Expression Complete Systems、Platinum Retroviral Expression Systems以及RAPAd® Adenoviral Expression Systems等。更多病毒包装质粒系统介绍请点这里。

2. 病毒包装试剂

A. 病毒包装专用转染试剂
西美杰代理的美国Mirus公司新推出的病毒包装专用转染试剂TransIT®-VirusGEN™与TransIT®-Lenti系列，专门针对AAV和Lentivirus设计，相比传统转染方法能获得更高的转染效率和病毒滴度，无动物源成分且兼容多种病毒包装系统及不同细胞系类型。

品名	货号	规格	适用病毒类型
TransIT®-VirusGEN™ Transfection Reagent	MIR 6703	0.3/0.75/1.5mL	AAV & Lentivirus
TransIT®-Lenti Transfection Reagent	MIR 6603	0.3/0.75/1.5mL	Lentivirus

B. Lv/Rv包装效率增强剂Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up
西美杰独家代理的101Bio品牌Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up用于重组慢病毒或逆转录病毒包装过程，可促进病毒基因组转录和RNA稳定，使转染效率提高10倍左右。

品名	货号	规格	适用病毒类型
Lentivirus 10X Titer-Up	P906	1 mL	Lentivirus
Retrovirus 10X Titer-Up	P909	1 mL	Retrovirus

C. AAV/Adv病毒释放液Virus-High® AAV/ADV Release Solution
西美杰独家代理的101Bio品牌Virus-High® AAV/ADV Release Solution是一款无需反复冻融，即可从细胞中快速高效收获AAV/Adv病毒以及其他非分泌型无囊膜病毒的试剂。

品名	货号	规格	适用病毒类型
Virus-High® AAV / Adv Release Solution	P900	10 mL	AAV & Adv

3. 高效快速病毒浓缩试剂与纯化试剂盒
西美杰独家代理的美国Cali-bio和Cell Biolabs品牌专门针对病毒载体设计的高效重组病毒浓缩纯化试剂（盒），在获得重组病毒高回收率的同时大大简化操作流程，无需超速离心设备，是中小规模样本纯化的首选方案。

重组病毒类型	品名	货号	特点
逆转录病毒（Retrovirus）	Retrovirus Concentration Solution（5×）逆转录病毒浓缩试剂	CB300904	无需超速离心； 1小时内病毒浓缩10-100倍；浓缩后病毒适用于各种细胞；
慢病毒（Lentivirus）	Lentivirus Concentration Solution（5×）慢病毒浓缩试剂	CB300905
ViraBind™ Lentivirus Purification Kit	VPK-104	操作时间< 2h，无需超速离心；
回收率>90%，纯化效果与CsCl方法相当
腺相关病毒（AAV）	ViraBind™ AAV Purification Kit （适用样本量为2个10cm皿或1个15cm皿收获的上清）	VPK-140	适用于纯化AAV-2与AAV-DJ；操作时间约3h；
ViraBind™ AAV Purification Mega Kit （一次处理样本量可达10个15cm皿收获的上清）	VPK-141	获得AAV纯度>95%，回收率>60%
腺病毒（ADV）	ViraBind™ Adenovirus Miniprep Kit （适用样本量为1个T75瓶或1个10cm皿收获的上清）	VPK-099	采用特殊滤膜和离心柱；操作时间约30min，无需超速离心；
ViraBind™ Adenovirus Purification Kit （适用样本量约为4个T75瓶收获的上清）	VPK-100	回收率>90%，纯化效果与CsCl方法相当

4. 病毒滴度检测试剂盒
精确测定重组病毒滴度是提高下游实验可控性，重复性和准确性的前提，西美杰代理的Cell Biolabs品牌针对不同病毒载体的特性分别设计的了多种滴度测定试剂盒，并且兼容了高效和精确的测定方法。

重组病毒类型	品名	货号	特点
慢病毒（Lentivirus）	Lentivirus Rapid Quantitation Kit	VPK-112	快速定量，操作过程45-60min；荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度，纯化前或纯化后样品都可检测；灵敏度：1010个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清


Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit	VPK-107	ZLPull-down技术分离出病毒相关P24蛋白，去除游离P24蛋白； ELISA方法精确定量有活性的重组慢病毒滴度，避免传统方法检测总P24蛋白导致的误差
Traditional p24 ELISA Kit	VPK-108-H	ELISA方法检测总P24蛋白定量慢病毒滴度
逆转录病毒（Retrovirus）	QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit	VPK-120	快速定量，操作过程45-60min；荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度，纯化前或纯化后样品都可检测；灵敏度：1.5×109个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清
腺相关病毒（AAV）	QuickTiter™ AAV Quantitation Kit	VPK-145	快速定量，操作过程<2h；荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度；灵敏度：纯化前AAV可达109 GC/mL，对于纯化后AAV可达5×1010 GC/mL


腺病毒（ADV）	QuickTiter™ Adenovirus Quantitation Kit	VPK-106	快速定量，操作过程45-60min；荧光法检测病毒核酸浓度定量病毒滴度，纯化前或纯化后样品都可检测；灵敏度：1010个病毒粒子/mL或100ul纯化前上清
QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit	VPK-109	无需空斑形成实验，避免复杂的铺琼脂步骤，操作更简便；传统方法10天才可完成的实验，用该试剂盒仅需2.5天，有ELISA和ICC两种方法供选择；
QuickTiter™ Adenovirus Titer ELISA Kit	VPK-110	可用于所有41个血清型的腺病毒

5. 病毒感染增强试剂
西美杰代理的Cell Biolabs品牌还针对不同病毒载体研发了专用促病毒感染试剂，能显著提高病毒对靶细胞的感染，进而提高基因表达效率。

品名	货号	规格	特点
ViraDuctin™ Lentivirus Transduction Kit	LTV-200	40 次	复合型试剂能与慢病毒或逆转率病毒形成复合物，与Polybrene®相比病毒感染效率可提高2-6倍，适用于原代细胞和干细胞
LTV-201	200次
ViraDuctin™ Retrovirus Transduction Kit	RV-200	40次
RV-201	200次
ViraDuctin™ AAV Transduction Kit	AAV-200	10次	有效提高重组AAV在多种细胞内的转染效率，包括传统方法转导效率低的细胞和非分裂细胞，如原代细胞和干细胞。该试剂使用方便，仅需2h，是AAV转染非分裂细胞的首选。
AAV-201	50次
ViraDuctin™ Adenovirus Transduction Reagent	AD-200	10次	该试剂让重组腺病毒感染不依赖于细胞的CAR（柯萨奇病毒-腺病毒受体）水平，可显著提高病毒感染低CAR或无CAR表达的细胞，如原代细胞或干细胞，还可提高转入基因的表达效率
AD-201	50次

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周锦帆