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病毒包装技术——病毒包装实验经验总结

2020.6.02

第一,细胞状态、载体系统、目的基因对病毒包装影响(基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等)是三个主要影响病毒质量的因素。

第二,细胞状态需要有丰富的细胞培养经验来判断,比如包装或转染感染前一定要重视细胞干净细微污染与否、饱满立体感是否好、铺板均匀细胞密度适中否等性状。另外转染时细胞的密度要十分注意,一般在70%左右。

第三,建议使用商品化的成熟毒载体系统。

第四,至于包装转染时的操作控制细节及其转染试剂因素,需要注意,不要在中途细胞被污染导致整个过程都需要重复。

第五,另一个需要关注的是目的基因的表达载体构建和抽提纯化环节,中抽纯化是否污染,纯度是否到达要求等。这些环节也是保证病毒质量的关键环节。

第六,目的基因的大小、序列情况、该目的蛋白的功能毒性等能影响导致包装的成功与否,我们可以通过更换病毒包装载体系统,尝试其他载体系统来实现目的。

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