亮氨酸氨肽酶的测定实验
实验方法原理
实验材料 酶样品
试剂、试剂盒 Tris-HCl氯化镁亮氨酸亮氨酰
仪器、耗材 分光光度计
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
1. 加样
2. 计算
25℃ 时,于 238 nm 处吸收值降低。
空白对照用 0.8 ml 0.0625 mol/L 亮氨酸代替亮氨酰,并且忽略实验混合物中的水量。
于 238 nm(am=吸收值/亮氨酰浓度)处,借助于校准曲线可测得酶的活性。
注意事项
其他
试剂:
0.5 mol/L Tris-HCl,pH 8.5
0.025 mol/L 氯化镁(MgCl2·2H2O,Mr=161.9;40.5 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L 氯化镁(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203 mg 溶于 10 ml 水中)
0.0625 mol/L 亮氨酸(Mr=131.2;820 mg 溶于 100 ml 水中,调至 pH 8.5)
0.125 mol/L 亮氨酰(亮氨酰盐酸,Mr=166.7;2.08 g 溶于 100 ml,调至 pH 8.5)
酶样品 [LAP(0.1 ml 约相当于 0.4 mg)必须在 37℃ 激活,在使用前先在 0.05 ml 0.025 mol/L MnCl2、0.05 ml 0.5 mol/L Tris-HCl pH 8.5、0.8 ml 水的混合物中培养 2 h]
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