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诊疗又添利器，数字PCR检测对新冠病毒有更高的检出率和灵敏性

PilotGene

2021.6.04

温州医科大学附属台州医院沈波主任团队在《AGING-US》杂志上发表题为“Evaluation of droplet digital PCR for quantification of SARS-CoV-2 Virus in discharged COVID-19 patients”的研究论文。该研究使用领航基因液滴数字PCR系统（D3200）与实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）进行对比实验，探索验证液滴数字PCR（droplet digital PCR , ddPCR）对于低病毒载量检测的灵敏性和检出率。

研究目的

新型冠状病毒病(COVID-19)爆发后，迅速蔓延到全球180多个国家，世界卫生组织(WHO)宣布其为大流行。虽然目前qPCR是临床检测SARS-CoV-2病毒的标准方法，但部分新冠感染患者康复治疗检测阴性出院后发生“复阳”现象，由此表明qPCR方法可能未能检出部分携带低病毒载量的患者，导致假阴性结果出现。此外，qPCR方法不能提供病毒绝对定量信息，不易评估疾病进展和预后。因此，为了防止SARS-CoV-2病毒进一步传播，确保及时治疗受感染的病人，目前临床迫切需要一个更加精准、更加灵敏的检测方法来快速识别感染患者和无症状病毒携带者。

方法与结论

多项研究表明，ddPCR具有绝对定量的优势，对病毒检测的灵敏性高于qPCR。在本研究中，台州医院研究团队对43例正在康复治疗的COVID-19患者收集的74份临床样本进行了ddPCR和qPCR的同步盲检，检测结果证实了ddPCR的灵敏性高于qPCR方法，并且建立了COVID-19患者的ddPCR检测阈值。

临床数据

74份临床样本（粪便标本36份，痰标本36份，咽喉拭子2份）ddPCR和qPCR检测结果（检测结果见下表），qPCR结果显示阳性27份，阴性47份；ddPCR结果显示41份样本为阳性，33份样本为阴性。ddPCR与qPCR结果不一致的样本有16份，由于上述样本均来自确诊的COVID-19患者,故认为全部样本皆为阳性。ddPCR阳性检出率明显高于qPCR(55.41%VS36.49%，P<0.05）。

对于低病毒载量的样本，尤其是在出院患者中，ddPCR检测SARS-CoV-2的效果优于qPCR。因此，研究团队又分析了9例复阳的出院患者的18份保留样本。qPCR结果显示，18份保留样本均为阴性。然而，ddPCR结果显示12份样品为阳性，只有6份样品为阴性。其中，只有1例患者有2份样品为阴性；其他8例患者至少有一份阳性样本(检测结果见下表)。这一结果表明，ddPCR显著提高了诊断的准确性，特别是对于携带低病毒载量样本的出院患者。

总结

本研究从43例康复治疗住院患者中选取74份临床样本进行qPCR和ddPCR双盲检测，结果表明，在阈值为0.04 copies/µL时，ddPCR的灵敏性和特异性分别为97.6%和100%。此外，还分析了9例复阳出院患者的18份保留样本，再次证实ddPCR的检测灵敏性。上述结果表明,相比于qPCR检测方法，ddPCR检测方法可以显著提高COVID-19诊断的准确性，特别是对病毒载量较低的出院患者，可以显著降低目前基于传统方法（qPCR）临床诊断时的假阴性率，从而降低病毒传播的潜在风险。此外，由于ddPCR方法可以对病毒载量进行绝对定量，因此也有助于对新冠患者的临床治疗方案进行动态监控。

关于领航基因

领航基因科技（杭州）有限公司是一家专业从事生命科学产品研发、生产、销售及服务的国家级高新技术企业。公司拥有高水准的多学科交叉技术研发团队和高素质的资深销售团队，建立了国际顶尖的研发中心及GMP生产基地，拥有六十多项自主知识产权。公司专注于数字PCR（Digital PCR）技术的研发，相关产品已获得NMPA注册证。现已推出高通量、低成本、全自动的数字PCR检测平台，应用于病原微生物检测、肿瘤液体活检、生殖和遗传等领域，为用户提供整套完整的分子诊断解决方案。领航基因将持续突破革新，充分发挥自身在科技成果转化和高新技术产业发展中的作用，使基因检测惠及大众，实现医疗机构、政府、百姓多方共赢，为人类健康事业做出更大的贡献。