FRET可以采用恒定状态或时间分辨技术,但时间分辨的FRET成像具有更精确地映射供体-受体距离的优点。一台标准的宽场荧光显微镜,配备适当的激发和发射滤光片和一个灵敏的摄像机就可以用来进行FRET成像。将对环境敏感的蛋白质或肽夹在两种FRET适用的荧光蛋白之间的生物传感器目前在细胞生物学中得到广泛应用。这些探针很容易在宽场荧光显微镜下用敏化发射FRET技术结合比率分析成像。...
一种实际的激光扫描共聚焦显微镜示意图成像特点—分辨率对比宽场照明大幅提升—在荧光显微镜中,单点发射的光强度由点扩散函数(PSF)描述,其图案就是一个艾里斑,荧光系统的分辨率可以由艾里斑的半径来描述,艾里斑的半径可以由物镜的数值孔径和激发光的波长决定:另一种荧光系统分辨率测量方式是半高宽最大值,即强度下降到峰值50%的值,此时宽场荧光照明的横向分辨率为:激光扫描共聚焦显微镜的分辨率为:这表明,共聚焦显微镜的理论最大分辨率比宽场照明提高了倍...
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