ASTM F3294-18
用宽场荧光显微镜在细胞分析中进行定量荧光强度测量的标准指南
Standard Guide for Performing Quantitative Fluorescence Intensity Measurements in Cell-based Assays with Widefield Epifluorescence Microscopy
- 标准号
- ASTM F3294-18
- 发布
- 2018年
- 发布单位
- 美国材料与试验协会
- 当前最新
- ASTM F3294-18
- 引用标准
- ASTM E131 ASTM E2186 ASTM E2642 ASTM E2719 ASTM E2825 ASTM E284 ASTM F2944 ASTM F2997 ASTM F2998 ISO 13653
- 适用范围
- 1.1 本指导文件的制定是为了方便使用落射荧光显微镜收集显微图像，从而可以从图像中提取定量荧光测量值。该文件是为经常使用荧光染色技术来可视化基于细胞的实验系统的组件的细胞生物学家量身定制的。仅当图像基于合理的实验设计和数字阵列探测器的适当操作（例如电荷耦合器件（CCD）或科学互补金属氧化物半导体（sCMOS）进行定量）时，才可能对这些图像中可用的强度数据进行定量比较。 ）或类似的相机。考虑涉及阵列检测器和控制器软件设置的问题，包括收集暗计数图像以估计偏移、平场校正、背景校正、激发灯和荧光收集光学器件的基准测试。
1.2 本文件是围绕落射荧光显微镜开发的，但这里讨论的许多问题很可能适用于其他荧光显微镜系统（例如荧光共焦显微镜）中的定量成像。本指南是围绕单色荧光显微镜成像或多色成像开发的，其中测量的荧光在光谱上得到很好的分离。
1.3 荧光强度是相对测量值，本身没有相关的 SI 单位。本文件确实讨论了与相对测量和实验设计相关的计量问题，这些问题可能需要确保定量荧光测量在改变显微镜、样品和灯配置后具有可比性。
1.4 本标准并不旨在解决与其使用相关的所有安全问题（如果有）。本标准的使用者有责任建立适当的安全、健康和环境实践，并在使用前确定监管限制的适用性。
1.5 本国际标准是根据世界贸易组织贸易技术壁垒（TBT）委员会发布的《关于制定国际标准、指南和建议的原则的决定》中确立的国际公认的标准化原则制定的。
ASTM F3294-18相似标准
推荐
显微成像小课堂丨荧光显微镜的应用
FRET可以采用恒定状态或时间分辨技术，但时间分辨的FRET成像具有更精确地映射供体-受体距离的优点。一台标准的宽场荧光显微镜，配备适当的激发和发射滤光片和一个灵敏的摄像机就可以用来进行FRET成像。将对环境敏感的蛋白质或肽夹在两种FRET适用的荧光蛋白之间的生物传感器目前在细胞生物学中得到广泛应用。这些探针很容易在宽场荧光显微镜下用敏化发射FRET技术结合比率分析成像。...
浅谈 | 激光共聚焦显微镜特点及应用
一种实际的激光扫描共聚焦显微镜示意图成像特点—分辨率对比宽场照明大幅提升—在荧光显微镜中，单点发射的光强度由点扩散函数（PSF）描述，其图案就是一个艾里斑，荧光系统的分辨率可以由艾里斑的半径来描述，艾里斑的半径可以由物镜的数值孔径和激发光的波长决定：另一种荧光系统分辨率测量方式是半高宽最大值，即强度下降到峰值50%的值，此时宽场荧光照明的横向分辨率为：激光扫描共聚焦显微镜的分辨率为：这表明，共聚焦显微镜的理论最大分辨率比宽场照明提高了倍...
光学显微镜的主要观察方法之荧光观察
、光毒性低，特别适合进行发育、活体动态观察等研究；荧光寿命成像(FLIM），不受荧光物质浓度、光漂白、激发光强度等因素的影响，能更加深入地进行功能性精准测量；荧光相关光谱(FCS)及荧光互相关光谱(FCCS），测量荧光分子的分子数、扩散系数，从而分析分子浓度、分子大小、粘性、分子运动、分子结合/解离、分子的光学特性等；全内反射荧光显微镜(TIRF)，极高的z轴分辨率，非常适合细胞膜表面的分子结构和动力学研究...
What！一台相机就可以得到超分辨图像？
100幅原始“输入”图像被记录为每一幅合成的超分辨图像，使得单幅超分辨成像速率为0.5HZ。相同条件对比未使用SRRF-Stream模块，100幅标准宽场图像被记录然后取平均。原始图像是一幅更大视野的细胞图像，图中是显示了一个被放大的细胞，为了更容易地通过一个小区域显示线强度剖面对比。从图像中可以显而易见的发现分辨能力的大幅改善。...