荧光显微镜与荧光光谱仪耦合而成的系统仪器能够获取显微荧光成像及微区荧光强度、荧光寿命的测定信息。选择荧光探针对被标记物进行特异性标记,荧光探针的亮度即荧光强度可反映被标记物相对含量的多少。荧光显微镜对图像采集后,荧光光谱仪可测量图像的荧光强度,对获取的图像进行荧光强度的定量,为全面分析和研究细胞内部结构提供更加详尽的数据信息。...
在活体细胞成像应用中,宽场荧光显微镜有助于观察放置于显微镜载物台上特定的环境室中生长的粘附细胞的动力学特性。在最基本的配置中,配备有EPI荧光照明的标准倒置组织培养显微镜与区域阵列检测器系统(通常是CCD摄像机)、合适的荧光滤色片和光闸系统耦合,以限制细胞过度暴露于有害的激发光。基本荧光显微镜依靠精心匹配的干涉滤色片来选择特定的带宽用于照明和检测发射光。...
成像速度高内涵仪器是在显微镜的基础上搭建的高速显微成像的平台,从所得图像中抽出一张和普通显微镜拍摄的图像没有区别,也就是说,宽场荧光显微镜型高内涵提供的是宽场荧光显微图像,而共聚焦荧光显微镜型高内涵提供的是共聚焦质量的图像。高内涵仪器和普通显微镜最本质的区别在于成像速度极大提高。...
FRET可以采用恒定状态或时间分辨技术,但时间分辨的FRET成像具有更精确地映射供体-受体距离的优点。一台标准的宽场荧光显微镜,配备适当的激发和发射滤光片和一个灵敏的摄像机就可以用来进行FRET成像。将对环境敏感的蛋白质或肽夹在两种FRET适用的荧光蛋白之间的生物传感器目前在细胞生物学中得到广泛应用。这些探针很容易在宽场荧光显微镜下用敏化发射FRET技术结合比率分析成像。...
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