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浙大周雪平、清华戚益军教授Cell子刊发表植物学新成果
植物病毒感染通常会引起遗传、激素和代谢的紊乱，导致疾病的症状，如叶片黄化，叶片扭曲、矮化、萎蔫、坏死等异常。芜菁黄叶病毒（TYMV）是一个正链RNA病毒，可侵染拟南芥和芸薹属植物物种，并引起亮黄色花叶症状。TYMV基因组包含三个开放阅读框（ORF），它们分别编码假定的RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）与病毒毒力蛋白P69。不依赖于TYMV感染，P69的转基因表达足以引起某些症状，包括淡绿色的叶子，矮小，开花延迟和低生育率。已有研究提出，这些症状部分归因于增强的miRNA积累和miRNA靶基因的表达降低，这是由P69引起的。然而，目前尚不清楚的是，P69是如何通过miRNA独立机制而导致这些疾病症状的。
该研究小组推测，P69可能与宿主因子相互作用，并妨碍其引发疾病的功能。因此在这项研究中，他们进行了酵母双杂交筛选，把P69用作诱饵对抗来自拟南芥幼苗的一个cDNA文库，以确定P69相互作用的宿主蛋白。研究人员得到了15个蛋白质作为P69的阳性结合伙伴。其中，Golden2-样1（GLK1）和GLK2引起了研究人员极大的兴趣。GLK1和GLK2的GARP转录因子超家族的成员，并采取多余的行动来调节一系列核光合基因的表达，从而调节叶绿体的发育和维护。GLKs包含两个独特的结构域：GLK DNA结合结构域和C-末端结构域，称为GCT盒。
酵母双杂交实验表明，P69通过GCT盒与GLKs结合。接下来研究人员在叶肉细胞原生质体中进行了双分子荧光互补（BiFC）实验，以进一步检查P69是否以及在哪里与GLK蛋白相互作用。他们发现，P69在叶肉细胞的细胞核中与GLK蛋白共定位和相互作用。
研究人员还产生了过表达C-末端HA标记P69的转基因株系，以及在P69-HAox转基因株系与GLK1-Flagox株系的杂交后代中的P69-HA和GLK1-Flag的免疫共沉淀。FLAG标记的GLK1（在GLK1 GLK2突变的背景下，GLK1-Flagox）。P69和GLK1之间的相互作用，通过P69-HAox 转基因株系与GLK1-Flagox 株系杂交后代的P69-HA和GLK1-Flag的共免疫沉淀而得以证实。
