葡萄球菌属细菌的微生物学检验:一、生物学特性葡萄球菌是革兰阳性球菌，大小0．5～1．5μm ，呈单、双、四联、短链状或无规则葡萄状排列。无动力、无芽胞。其代谢方式是呼吸兼发酵。触酶阳性。通常氧化酶阴性，还原硝酸盐，能被溶葡萄球菌素溶菌，但不被溶菌酶溶菌。能利用多种碳水化合物，产酸。产生胞外酶，如葡萄球菌血浆凝固酶。多数菌为兼性厌氧菌，有氧条件下生长好，最适生长温度35 ℃～40 ℃，最适p H7．0～7．5 。金黄色葡萄
一、生物学特性
葡萄球菌是革兰阳性球菌，大小0．5～1．5μm ，呈单、双、四联、短链状或无规则葡萄状排列。无动力、无芽胞。其代谢方式是呼吸兼发酵。触酶阳性。通常氧化酶阴性，还原硝酸盐，能被溶葡萄球菌素溶菌，但不被溶菌酶溶菌。能利用多种碳水化合物，产酸。产生胞外酶，如葡萄球菌血浆凝固酶。多数菌为兼性厌氧菌，有氧条件下生长好，最适生长温度35 ℃～40 ℃，最适p H7．0～7．5 。金黄色葡萄球菌某些少见菌株，亦需要CO2 或血红素、维生素K等物质。葡萄球菌细胞壁缺陷型菌株适宜在高渗环境中生长。DNA 中G＋C含量：30～39 mol％。模式菌：金黄色葡萄球菌。
二、微生物学检验
1．检验程序
2．标本采集
由于该属细菌对干燥和温度抵抗力强，且易从感染部位获取标本，故按常规方法采取标本。然而该属细菌广泛分布在人体皮肤和粘膜， 采取时避免病灶周围正常菌群污染。
3．标本直接检查
无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂片、革兰染色、直接显微镜检查，查见细菌具有重要临床价值，其他体液标本如同时伴有炎性细胞时则直接显微镜检查结果也具有参考价值。涂片检查发现有革兰阳性球菌，则可向临床发生初步报告“查见类似葡萄球菌属革兰阳性球菌”，并进一步用培养法和合适的鉴定技术予以证实。
4．分离培养与药学招聘鉴定
临床标本可接种于血琼脂平板，那些有污染的标本如粪便等应接种在选择平板上，如甘露醇高盐平板、哥伦比亚多粘菌素奈啶酸平板，血液标本则用肉汤增菌培养基。孵育过夜平板上可见直径约为2～3 mm，呈金黄色、白色或柠檬色的光滑、不透明、凸起圆形菌落，有时可见β溶血环。挑取菌落作鉴定试验，在鉴定结果报告以前， 平板应继续室温放置2 ～3 天，观察菌落性状，有助于菌种鉴定。
细菌鉴定方法如下：
（1)菌落性状。血琼脂平板孵育24h 后，菌落直径1～3 mm ，培养物继续置室温生长，2 ～3 天后不同种葡萄球菌菌落性状如下所述：
a．金黄色葡萄球菌：较大，直径为6～8 mm，光滑、完整、稍隆起，半透明，金黄色色素或橙色。
b．表皮葡萄球菌：较小，直径为5～6 mm ， 某些产粘液菌株能粘附在琼脂平板表面，无色素或白色色素。
c．溶血葡萄球菌：5～9 mm，光滑奶酪状，不透明，无色素或奶油色、黄色。
d．里昂葡萄球菌：4～7 mm，边缘整齐稍扁，奶色、黄色色素和沃氏葡萄球菌相似。
e．腐生葡萄球菌：5～8 mm 边缘整齐，光滑，不透明，凸起，白色或拧檬样色素。疑为葡萄球菌属细菌菌落以革兰染色证实为阳性球菌，以与酵母菌区别。
（2)凝固酶试验。是广泛应用于鉴定引起急性感染的病原性葡萄球菌的一种试验。有玻片法和试管法两种。该试验所使用的血浆为EDTA抗凝兔血浆。
a．玻片凝固酶试验：金黄色葡萄球菌表面有结合的凝固酶（聚集因子)，与血浆中的纤维蛋白原交联使菌体快速凝聚。试验时挑取少数菌落培养物（不能用生长于高盐琼脂上的菌落) 加入一滴血浆，10秒内观察细菌聚集和凝块形成。金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌呈现阳性反应。
b．试管凝固酶试验：细菌分泌到菌体外的凝固酶被血浆中的协同因子（cofactor)激活形成复合物，再使纤维蛋白原转变成纤维蛋白。试验时，以孵育过夜的牛心脑浸液肉汤培养物和血浆在37 ℃水浴中孵育4h，观察凝块形成。如试验结果为阴性者再置室温18～24h ，因某些菌种（中间葡萄球菌、猪葡萄球菌) 的凝集出现所需时间长4h 。但必须注意：
① 某些菌株产生的葡激酶在延长孵育时间后可使凝块溶解使之产生假阴性；
② 若使用不是无菌血浆可产生假阳性或假阴性结果；
③ 细菌不是纯培养物或污染可导致假阳性。
c．其他凝固酶试验：尚有商品化胶乳凝集试验和间接血凝试验检测凝固酶。胶乳凝集试验较一般的玻片法的特异性和敏感度高。
另外有一种新型的玻片试管法试验， 先将冻干的兔血浆置人反应管中，
用前复溶，混人数个菌落，1 分数时悬液凝聚者为阳性，仍为悬液者为阴性。再将阴性反应管再经35 ℃温育5 小时，观察是否凝固以判断是否存在游离凝固酶。
（3)耐热核酸酶试验。大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄球菌能产生耐热核酸酶。将待测菌的过夜肉汤培养物置沸水浴15min 后， 滴加于含甲苯胺蓝核酸琼脂上已打好的直径为2～5 mm 小孔内，置35 ℃ 孵育，1h 后观察结果，环绕孔周围蓝色琼脂转变为粉红为阳性。此外表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐热核酸酶。
（4)磷酸酶试验。大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪葡萄球菌，该试验阳性。将待测菌种点种在加有硝基酚磷酸盐的p H5．6 ～6．8 M H 琼脂上，孵育18 ～24h ，菌落周围出现黄色为阳性。
（5)吡咯烷酮芳基酰胺酶试验。溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌和中间葡萄球菌为试验阳性。将孵育24 小时斜面培养物接种在含吡咯烷酮－β萘基酰胺（PY R) 肉汤中，使细菌浓度为2 号麦氏管浊度，35 ℃ 孵育2小时，加入PYR试剂后2分钟内呈现深紫红色为阳性。
（6)其他鉴定试验。鸟氨酸脱羧酶试验、脲酶试验、β－半乳糖苷酶、3－羟基丁酮酸试验、新生霉素敏感试验、多粘菌素B 耐药试验、糖产酸试验是常用的葡萄球菌属种间细菌的鉴定生化试验。临床上常见葡萄球菌菌种的鉴别见下表。商品化鉴定系统多应用糖发酵、传统的鉴定试验以及酶的产色底物试验，常用的有API 、Staph－ID 系统、APIstaph 系统，ID32staph 系统、uiten 革兰阳性鉴定卡、Microscan系统、Miniten 系统等。
