DC-CIK细胞制备方法（三）
5.0 DC-CIK细胞的制备和质检
5.1 收集步骤4和步骤3中所获得的DC 细胞和CIK 细胞，按1:10(数目比)的比例共培养，无血清培养液中添加重组人IL-2 (300 U/ml)；
5.2 每3天半量换液一次，并补加重组人IL-2 (300U/ml)。
5.3 在第7d 收集细胞，细胞数量应达到1×1010个以上；
5.4 DC-CIK细胞的质检：
5.4 .1台盼蓝染色检测：活细胞应在80%以上；
5.4 .2流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD8、CD56等分子的表达：CD3+CD56+细胞的比例应在20%以上。
5.4 .3细胞杀伤实验：以DC-CIK细胞为效应细胞，以肿瘤细胞(可为原代肿瘤细胞或肿瘤细胞株)为靶细胞，将效应细胞与靶细胞按10:1(数目比)的比例加入96
孔U型板中，每孔含靶细胞1 x 104个，终体积为200ml，设3个复孔。培养4h，然后取培养上清，用乳酸脱氢酶(LDH)
试剂盒检测效应细胞对靶细胞的杀伤率。
5.4 .4收获细胞前，取少量培养物进行细菌、真菌培养，并检测支原体、衣原体，及内毒素(标准：病原学检测阴性，内毒素<5 Eu)。
注：AF即Animal
Free意为无动物成分。无动物成分的重组细胞因子在生产过程中不会有任何动物源性物质，尤其是牛蛋白的混入，使得最终获得的重组人蛋白中不含任何动物成分。这样可避免动物病原体(如疯牛病，克雅氏病等)的污染及外源蛋白引起的机体异种排斥和过敏反应，因此细胞治疗的体外细胞培养过程中最好使用无动物成分的重组细胞因子。
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