多重端粒荧光原位杂交实验（一）
实验方法原理
实验材料 永生化淋巴细胞株
试剂、试剂盒 青霉素谷氨酰胺胎牛血清植物血球凝集素胸苷秋水仙胺KCl甲醇冰乙酸柠檬酸钠SSC甘油生物素-16-dUTP地高辛-11- dUTP10 XdNTP 混合物
仪器、耗材 超净台细胞培养瓶Nunc 管培养基相差显微镜染色缸加热板 装有Pinkel滤光片轮的CCD显微镜 Chromoprobe Multiprobe®-T 试剂盒恒温摇床氨苄青霉素卡那霉素氯霉素LB琼脂平板2 X YT 培养基
实验步骤
一、固定的中期染色体细胞悬液的制备
（1）外周血样品
1.37℃水浴锅内预热RPMI-1640培养基、FCS、L-谷氨酰胺和青霉素/链霉素。
2.在二级细胞培养用超净台中，无菌条件下配制完全培μ基：100mL FCS、5mL L-谷氨酰胺、5mL青霉素/链霉素，加RPMI-1640至500ml。3.在2个Nunc培养管中，各加0.25mL外周血、5mL完全培养基、PHA(终浓度2%)。
4.37℃培养箱中孵育72h。
5.加10OpL15mg/mL的胸苷到每个培养物中，轻轻混匀。
6.37℃培养箱中孵育16〜18h。
7.180g离心5min。
8.弃上清，用5mL完全培养重悬细胞。
9.180g离心5min。
10.弃上清，用5mL完全培养重悬细胞团块。
11.37℃条件下孵育5h。
12.加100/×L10jLtg/mLKaryoMa×秋水酰胺。
13.37℃条件下孵育10min。
14.180g•离心5min。
15.弃上清，用37℃预热的7mL0.075mol/L KCl悬起细胞团块。
16.37℃条件下孵育15min。
17.180g离心5min。
18.弃上清。
19.将管子放在涡旋振荡器上以中速振荡，缓慢滴加预冷的甲醇：冰乙酸(3:1)固定液到细胞中。当细胞悬液变成褐色时，加速滴加固定液，至总体积5mL。
20.180g离心5min，弃上清。
21.加5mL预冷的固定液。
22.180g•离心5min，弃上清。
23.加5mL预冷的固定液。
24.180g离心5min，弃上清。
25.加3mL预冷的固定液重悬细胞。
26.储存在-20℃条件下备用。
