强迫游泳实验和开场实验相关-降糖解郁茶饮防...（一）
强迫游泳实验和开场实验相关-降糖解郁茶饮防治糖尿病并发抑郁症的作用
降糖解郁茶饮防治糖尿病并发抑郁症的作用
〔摘 要〕 目的 考察降糖解郁茶饮防治糖尿病抑郁症作用。方法 雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药〔盐酸二甲双胍( DMBG，100 mg / kg) 、盐酸氟西汀( FH，10 mg / kg) 联合用药〕和降糖解郁茶饮低、中、高剂量组( 1、2、4 g / kg) ，连续灌胃( ig) 给药 21 d，1 次 / d，末次给药后 1 h进行糖水消耗实验( SCT) 、开场实验( OFT) 、强迫游泳实验( FST) 和血糖测试。结果 与正常组比较，模型组小鼠血糖显著升高、糖水偏爱显著降低、游泳不动时间显著增加、OFT 运动时间和站立次数显著降低( P＜0. 05 或 P＜0. 01) ; 与模型组比较，降糖解郁茶饮和 DMBG+FH 均可使以上异常指标显著改善，二者相比无显著差异。结论 降糖解郁茶饮具有防治糖尿病并发抑郁症的作用，且与阳性药 DMBG+FH 作用相当。
〔关键词〕 降糖解郁茶饮; 糖尿病并发抑郁症; 糖水偏爱; 强迫游泳实验; 开场实验
抑郁症是糖尿病常见并发症之一，糖尿病患者抑郁症发病率是正常人的 3 倍。国外文献报道，糖尿病病人中 60% ～ 75%伴有抑郁情绪，其中 10% ～ 35% 为重度抑郁。就糖尿病而言，沉重的精神压力、不良情绪不仅会使血糖升高，降低治疗的依从性，还会加速心、肾等并发症的发生，对病情的预后不利。反之，血糖控制不好，病情加重，又会导致病人精神痛苦、悲观等，加重他们的抑郁症状。此外，重度抑郁还会引起悲观和绝望，甚至出现自残和自杀行为。本研究旨在考察降糖解郁茶饮防治糖尿病并发抑郁症的药理作用，为其开发奠定前期实验基础。
1 材料与方法
1. 1 动物 昆明( KM) 小鼠，雄性，SPF 级，体质量 18 ～ 22 g，由河南省实验动物中心提供〔SCXK( 豫) 2010-0002〕。
1. 2 试药 盐酸二甲双胍片( DMBG) : 上海信宜药厂有限公司，批号48140908; 盐酸氟西汀( FH) : 常州四药制药有限公司，批号 20130701; 链脲佐菌素( STZ) : Sigma，批号 20150225; 蔗糖( 分析纯) : 天津致远化学试剂有限公司，批号 2014111061; 枸橼酸( 分析纯) : 天津致远化学试剂有限公司，批号: 20150201; 氢氧化钠( 分析纯) : 天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号20140723; 生 理 盐 水: 河 南 太 龙 药 业 股 份 有 限 公 司，批 号13012152; 血糖试纸: 江苏鱼跃医疗设备股份有限公司，鱼跃;毛冬青: 经本校药学院生药学科陈随清教授鉴定为冬青科植物毛冬青 Ilex pubescens Hook. et Arn. 的干燥根; 合欢花: 经本校药学院生药学科陈随清教授鉴定为豆科植物合欢 Albizzia julibris-sin Durazz. 的干燥花序; 栀子: 经本校药学院生药学科陈随清教授鉴定为茜草科植物栀子 Gardenia jasminoides Ellis 的干燥成熟果实; 牡丹皮: 经本校药学院生药学科陈随清教授鉴定为毛茛科植物牡丹 Paeonia suffruticosa Andr. 的干燥根皮。
1. 3 仪器 血糖仪: 江苏鱼跃医疗设备股份有限公司，鱼跃710，悦准 TMI 型; 大小鼠开场活动实验系统: 上海欣软信息科技有限公司，XR-XZ301，SuperFST强迫游泳视频分析系统：上海欣软信息科技有限公司，XR-XQ202; 旋转蒸发仪: 上海爱朗仪器有限公司，EYE-LA，N-1100; TDL-40B 台 式 离 心 机: 上 海 安 亭 科 学 仪 器 厂;BS210S 型电子天平: 北京塞多利斯天平有限公司; XK96-B 快速混匀器: 姜堰市新康医疗器械有限公司; FW-100 高速万能粉碎机: 北京中兴伟业仪器有限公司。
1. 4 方法
1. 4. 1 降糖解郁茶饮制备 将降糖解郁茶用 50 倍( W / V = 1 ∶50) 开水浸泡 6 次，每次 5 min，合并每次浸泡液( 用离心机分离上清液，4 000 r/min，离心 10 min) ，减压回收水，使药液浓度以生药计含降糖解郁茶 1 g/ml。
1. 4. 2 动物处理及血糖测试 用 0. 1 mol / L 枸橼酸钠缓冲液( p H4. 2) 配制 STZ 注射液，小鼠在禁食 16 h 后( 不禁水) 一次性腹腔注射( ip) STZ( 150 mg/kg) 造糖尿病模型; 造模后的小鼠经过 72 h 的自由饮食后，于尾静脉取血用血糖仪测定血糖值( 血糖＞11. 1 mmol/L 为糖尿病模型制作成功) 。筛选血糖＞11. 1 mmol / L 的小鼠再予慢性不可预知温和应激( CUMS)，每天随机给予一种应激。CUMS主要包括夹尾 3 min( 距尾尖1 cm) 、禁水 24 h( 8 ∶00 ～ 8 ∶00) 、潮湿饲养 24 h( 将 200 ml 水加入有锯 末 的 笼 底，24 h) 、禁 食 24 h ( 8 ∶ 00 ～ 8 ∶ 00) 、束 缚( 5 min) 、摇晃( 1次/s，15 min) 和冷水( 8℃ ) 游泳 7 min; 阳性药( DMBG-FH) 组采用 DMBG 100 mg/kg 和 FH 10 mg/kg 联合用药连续灌胃( ig) ，降糖解郁茶低、中、高剂量分别为 1、2、4 g/kg。模型组和正常组只 ig 给予等量溶媒( 0. 5% CMC-Na) ，其中正常组不给予造模。每天 CUMS 的同时，给予各受试药物或溶媒，连续 21 d，末次给药后 1 h 进行行为学测试; 行为学测试结束后立即尾静脉取血，测试血糖值。阳性药及各受试保健茶均用0. 5% CMC-Na 溶解或混悬至所需给药浓度。
1. 4. 3 糖水消耗试验( SCT) 小鼠于实验前 24 h 训练适应含糖饮水，在禁食禁水 12 h 后进行 SCT。测试时，所有小鼠单笼饲养，在安静的房间进行，每笼即每只小鼠放两个水瓶( 内分别装入清水和 1% 蔗糖水，体积均为 100 ml，两水瓶位置随机放置) ，2 h 后取走水瓶并测量体积( 测试前后瓶中水量之差) ，测定 2 h 内小鼠 1% 蔗糖水摄入体积及清水摄入体积，按公式计算每只动物的糖水偏爱。计算公式: 糖水偏爱 =〔糖水摄入体积/( 糖水摄入体积+清水摄入体积) ×100% 〕。
1. 4. 4 开场试验( OFT) 采用大小鼠开场活动实验系统 XR-XZ301 进行实验。实验时将小鼠放入中心方格内，记录小鼠在5 min内的运动距离和站立次数。
1. 4. 5 强迫游泳实验( FST)采用SuperFST强迫游泳视频分析系统XR-XQ202进行实验 ，实验时将小鼠单独放入高 20 cm、直径 14 cm 的圆柱形玻璃缸中，缸内水深 10 cm，水温( 25±2) ℃ ，在SuperFST软件中设置总时间6 min，数据分段处理后4 min内游泳累计不动时间( 指小鼠在水中停止挣扎，或显示漂浮状态，仅有微小的肢体运动以保持头部浮在水面) 。
1. 5 统计学方法 各组数据以 x±s 表示，采用 SPSS11. 5 软件，多组间比较用单因素方差分析( one-way ANOVA) ，组间两两比较用LSD 法。
3讨 论
本研究组在中医药理论的指导下，将毛冬青、合欢花、牡丹皮和栀子配方组成降糖解郁茶。其中，毛冬青为冬青科植物毛冬青 Ilex pubescens Hook. et Arn. 的干燥根，味甘、微苦，性平，归肺、肝、大肠经，具活血通络、清热解毒、利水渗湿之功效，具有降压、抗凝、抗脑组织缺血缺氧损伤、抗炎、调节免疫功能等广泛的药理作用; 合欢花为豆科植物合欢 Albizzia julibrissin Du-razz. 的干燥花序，具有安神解郁、滋阴补阳、活血、消痈肿之功效，适用于忿怒忧郁、虚烦不安、健忘失眠等症; 栀子为茜草科植物栀子 Gardenia jasminoides Ellis 的干燥成熟果实，药性苦、寒，归心、肺、三焦经，具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒、外用消肿止痛之功效，用于热病心烦、湿热黄疸、淋证涩痛、血热吐衄、目赤肿痛、火毒疮疡、外治扭挫伤痛等症的治疗; 牡丹皮为毛茛科植物牡丹 Paeoniasuffruticosa Andr. 的干燥根皮，药性苦、辛、微寒，归心、肝、肾经，清热凉血、活血化瘀，用于热入营血、温毒发斑、吐血衄血、夜热早凉、无汗骨蒸、经闭痛经、跌扑伤痛、痈肿疮毒等症的治疗。以上四药为主要原料组成的降糖解郁茶饮，具有清热、凉血、活血、利湿、疏肝解郁、泻火除烦、滋阴等多种功效，有望用于临床中多种类型的糖尿病并发抑郁症的防治。本研究结果显示，STZ 引起了小鼠血糖显著升高，进一步通过 CUMS 引起了小鼠的抑郁样行为，综合提示小鼠糖尿病抑郁症模型复制成功; 给予降糖解郁茶饮和阳性药 DMBG-FH 21 d后，过高血糖被显著降低、糖水偏爱显著升高、游泳不动时间显著减少、OFT 运动时间和站立次数均被显著升高，且本保健茶饮与 DMBG-FH 各指标相比均无明显差异，综合提示降糖解郁茶饮具有防治糖尿病并发抑郁症作用，且与 DMBG-FH 作用相当。现代研究表明，毛冬青煎剂和毛冬青甲素具有防治糖尿病并发症作用，合欢花总黄酮具有抗抑郁作用，栀子中栀子苷具有降糖、京尼平具有抗抑郁作用，牡丹皮中丹皮酚具有降糖、水提物具有抗抑郁作用。降糖解郁茶饮防治糖尿病并发抑郁症的作用，可能与其组成药物毛冬青、合欢花、栀子和牡丹皮中多种活性成分综合作用有关。
