强迫游泳、悬尾和跳台实验相关-复方甘麦大枣颗粒对抑...
强迫游泳、悬尾和跳台实验相关-复方甘麦大枣颗粒对抑郁动物模型的抗抑郁作用
复方甘麦大枣颗粒对抑郁动物模型的抗抑郁作用及对海马单胺类神经递质的影响
摘 要: 目的: 探讨复方甘麦大枣颗粒对动物抑郁模型的抗抑郁作用。方法: 采用小鼠强迫游泳试验、悬尾试验、跳台试验和利血平引起大鼠排空脑内单胺神经递质抑郁模型。结果: 复方甘麦大枣颗粒 21． 25 g/kg 和 42． 5g / kg 剂量组可明显延长小鼠强迫游泳累计不动时间。21． 25 g / kg 剂量组延长小鼠悬尾累计不动时间。与空白组比较有显著性差异( P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) 。复方甘麦大枣颗粒可明显缩短逃避至平台上的潜伏期 EL( s) ，减少错误次数。可对抗利血平排空脑内单胺神经递质多巴胺( DA) 和脑内皮质酮( CORT) 浓度。结论: 复方甘麦大枣颗粒可以改善动物抑郁行为，具有抗抑郁作用，其机制可能与改善脑内单胺类神经递质多巴胺( DA) 传递，降低皮质激素分泌有关。
关键词: 复方甘麦大枣颗粒; 抗抑郁; 行为学; DA; 皮质酮
现代生活的快节奏以及精神、心理等方面的压力，使抑郁症的发病率明显提高。严重躯体疾病、慢性病、脑器质性疾病容易诱发或导致抑郁症，其中内科病患者中抑郁发生率为 12% ～ 36% ; 巴金森氏病发生抑郁者为 50% ～ 70% ;脑卒中后抑郁发生率为 30% ～ 60% ; 老年期痴呆抑郁发生率为 10% ～ 40% ; 儿童患病率为1% 。然而目前尚没有一种有效的治疗方法能够在疗效、不良反应及预防复发方面尽如人意，约 15% 的患者伴有自杀倾向，对社会稳定与经济发展造成了很大影响。世界卫生组织( WHO) 预测到2020 年抑郁症将成为第二大致残疾病。因此，抗抑郁药物的研究越来越受到人们的重视。
中药复方具有成分多、作用环节多、靶点多的特点，尽管单一成份含量低，作用不明显，但可通过多靶点起作用，产生协同效益。既弥补了有效成份含量低的欠缺，也降低了不良反应。因此，对于研究中药复方的抗抑郁作用也越来越广泛。为了证实复方甘麦大枣颗粒多环节治疗 FD 的作用和确切机制，为复方甘麦大枣颗粒临床应用的拓展提供实验依据，本文通过多种抑郁模型对复方甘麦大枣颗粒的抗抑郁作用和相关机制进行了研究。
1 实验材料
1． 1 实验用药物 复方甘麦大枣颗粒: 由江苏省中医院制剂部提供。批号: 20140501 盐酸氟西汀胶囊: 由礼来苏州制药有限公司提供。批号: 3436A201403 氢溴酸东莨菪碱注射液: 由上海禾丰制药有限公司提供。批号: 02140401、利血平 Sigma 公司批号;BCBk8806v。
1． 2 实验用仪器 大 / 小鼠跳台实验系统 XR-3TB；强迫游泳实验系统；悬尾实验系统: 上海欣软信息科技有限公司制造。
1． 3 实验用动物和饲料 ICR 小鼠，体质量 20 ～ 22 g，由南通大学实验动物中心提供，合格证号: SCXK － ( 苏) 2014－ 0001。全价营养颗粒饲料: 由江苏省协同医药生物技术有限公司提供。批号: 20140618。
1． 4 实验条件 室温( 20 ± 2) ℃ ，湿度 55% ～ 65% ，光照适度，通风洁净良好。
1． 5 统计学处理 用 SPSS 16． 0 统计软件进行统计分析，统计学处理数据用( x珋± s) ，采用 t 检验。
2 实验方法
2． 1 实验分组和剂量 ①取 ICR 小鼠 150 只，雌雄各半，体质量20 ～22 g，随机分为以下 5 组，每组 30 只。空白组: 等量 NS，盐酸氟西汀组: 6． 67 mg/kg; 复方甘麦大枣颗粒大剂量组: 42． 5 g/kg，复方甘麦大枣颗粒中剂量组: 21． 25 g/kg，复方甘麦大枣颗粒小剂量组: 10． 63 g/kg，给药容量 20 m L/kg 分别进行对小鼠强迫游泳实验、悬尾实验和跳台实验。②取 SD 大鼠 60 只，雄性，体质量 200 ～ 220 g，随机分为 6 组，每组 10 只。适应饲养 3 天后，每日给药 1 次，正常组: 等量蒸馏水，1 mL/100 g，模型组: 等量蒸馏水，盐酸氟西汀组: 5． 33 mg/kg，复方甘麦大枣颗粒低剂量组: 7． 5 g/kg，复方甘麦大枣颗粒中剂量组: 含生药 15 g / kg，复方甘麦大枣颗粒高剂量组: 30 g/kg，1 m L/100 g，给药容量 10 m L/kg。
2． 2 复方甘麦大枣颗粒对小鼠强迫游泳实验 实验在安静的环境下进行，在正式强迫游泳实验前进行预游泳实验，将小鼠分别放入水深 10 cm，水温 25 ℃ ，5000 m L 容器内，适应性游泳 2 min，预实验结束后连续给药 4 周。末次给药后进行正式实验，给药 30 min 后，放入与预游泳相同的环境中，适应性游泳 2 min 后计算后 4 min 内小鼠强迫游泳的累计不动时间。( 小鼠表现为被动漂，挣扎行为消失持续 1min 被认定为不动状态。
2． 3 复方甘麦大枣颗粒对小鼠悬尾实验 实验在安静的环境下进行，连续给药 4 周，末次给药 30 min 后分别将每组小鼠尾部距末端 2 cm 处用胶带条固定悬挂，适应 2 min后计算 4 min 内小鼠悬尾累计不动时间( 小鼠表现为被动悬挂，肢体运动消失时被认定为不动状态) 。
2． 4 复方甘麦大枣颗粒对小鼠跳台实验 实验在安静的环境下进行，在正式跳台实验前进行预实验训练。连续给药四周后，末次给药 30 min 后，将小鼠轻放于跳台上，记录小鼠停留在平台上的潜伏期( SDL) 。小鼠自平台跳下，四肢接触电栅时，立即给予0.2mA电刺激，记录小鼠逃避至平台上的潜伏期( EL) 。记录其第 1 次跳下平台的时间，以及 5 min 内跳下平台次数( 错误次数) ，计算各组小鼠跳台潜伏期以及错误次数。
2． 5 复方甘麦大枣颗粒对给予东莨菪碱注射液后小鼠跳台实验 末次实验前腹腔注射东莨菪碱注射液 1 次，给药30 min 后，将小鼠置于跳台上，以小鼠四肢全部落到铜栅上为标志，记录小鼠停留在平台上的潜伏期( SDL) 。小鼠自平台跳下，四肢接触铜栅时，立即给予0.2mA电刺激，记录小鼠逃避至平台上的潜伏期( EL) 。记录其第 1 次跳下平台的时间，以及 5 min 内跳下平台次数( 错误次数) ，计算各组小鼠跳台潜伏期以及错误次数。
2． 6 统计学方法 各组大鼠连续 4 周，末次给药后，各组大鼠即刻腹腔注射利血平 4 mg/kg，之后 2、4、6、18 h
测定大鼠的肛温。将体温计探头插入大鼠肛门内，深度以温度计探头完全进入肛门为准，维持至少 2 min。动物处死前禁食不禁水，24 h
后处死大鼠，迅速置 － 20 ℃ 冰箱中 15 min后断头取出大脑，取 0． 2 g 置 2 m L 生理盐水中冰浴匀浆，3000 r /
min 离心 10 min，取上清液，采用 ELISA 法测定单胺类神经递质 DA，CORT
的含量，结果进行统计学处理。比较各组间的差异。其余脑组织作病理组织学检查。
4 讨论
现代生活的快节奏以及精神、心理等方面的压力，使抑郁症的发病率明显提高。严重躯体疾病、慢性病、脑器质性疾病容易诱发或导致抑郁症，其中内科病患者中抑郁发生率为 12% ～ 36% ; 巴金森氏病发生抑郁者为 50% ～ 70% ;脑卒中后抑郁发生率为 30% ～ 60% ; 老年期痴呆抑郁发生率为 10% ～ 40% ; 儿童患病率为 1% 。
然而目前尚没有一种有效的治疗方法能够在疗效、不良反应及预防复发方面尽如人意，约 15% 的患者伴有自杀倾向，对社会稳定与经济发展造成了很大影响。世界卫生组织( WHO) 预测到 2020 年抑郁症将成为第二大致残疾病。因此，抗抑郁药物的研究越来越受到人们的重视。
抑郁症( depression) 是一种以显著而持久的情绪低落、言语、减少、精神和行动迟缓等，表现为各种躯体症状、生理功能障碍的临床综合症。在中医观念中它属于郁症范畴，总因郁怒、思虑、悲哀、忧愁七情之所伤。导致脏腑阴阳气血失调而成。现代化学合成药; 如安定、氟西汀等在治疗和缓解抑郁症状方面有一定的疗效; 但是长期服用会出现严重的不良反应; 导致患者被迫停止治疗。因此，医学界越来越重视从传统中药中开发抗抑郁药。中医药在治疗抑郁症方面有独特的优势，其不良反应低、疗效显著。中药在治疗抑郁症方面的优势已得到越来越多人的认可。
甘麦大枣汤治疗抑郁症临床资料表明总有效率 90%以上。章永红名中医根据抑郁症多为心气虚证在临床运用甘麦大枣汤加合欢皮，地龙治疗，取得较满意疗效，而且患者并发症少，不良反应小，有较好的治疗依从性。临床使用甘麦大枣汤加合欢皮，地龙治疗后，临床效果可靠，用药安全。临床观察使用该方有效率在 93． 7% 。为了进一步验证复方甘麦大枣汤的有效性，进行了实验研究。
本实验采用强迫游泳实验和悬尾实验是国际上用于抗抑郁常见动物模型，其原理均是通过对动物施以无法逃避的应激刺激，造成动物的行为绝望以模拟人类的抑郁症症状。结果表明: 复方甘麦大枣颗粒可延长小鼠悬尾和强迫游泳累计不动时间。对给予东莨菪碱所至小鼠记忆障碍后，复方甘麦大枣颗粒可延长小鼠跳台潜伏期，减少错误次数。说明给予复方甘麦大枣颗粒后，对东莨菪碱所至记忆障碍有一定的改善作用。
利血平是一种抗肾上腺素能降压药，可消耗大脑内的肾 上腺素、5－ 羟色胺等神经递质。作为降压药，长期应用利血平可引起一系列抑郁症状，如失眠、悲观、失望忧愁、沮丧，甚至部分病人可以产生自杀念头等。药理学研究显示，利血平的药理作用是通过消耗脑内神经末梢囊泡内的单胺递质而实现其作用，实验采用 4 mg/kg 利血平腹腔注射，可造成 5 － HT、NA、DA 等与人类精神情感活动有关神经递质的改变，中脑一边缘叶 DA 系统主要调控情绪，实验表明复方甘麦大枣颗粒各剂量组有阻断利血平排空脑内单胺多巴胺( DA) 神经递质的趋势，但作用不明显。
研究证 实 抑 郁 症 患 者 血 浆 的 促 肾 上 腺 皮 质 激 素( ACTH) 和 CORT 均浓度升高，而经抗抑郁治疗后随着抑郁缓解两者浓度下降。本实验结果也表明复方甘麦大枣颗粒通过降低脑内皮质酮( CORT) 浓度治疗抑郁症。
采用利血平诱发抑郁大鼠 24 h 内，病理组织学检查表明各组动物的脑组织海马 CA1 和 CA3 区病理组织形态学无明显改变。可能与一次注入利血平有关。以上实验为复方甘麦大枣颗粒用于临床通过了初步的实验依据。
