双向电泳(two-dimensional electrophoresis)操作步骤及相关溶液
实验相关试剂配制
1.Bradford 工作液
95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考马斯亮兰G250,溶解完后再加磷
85%磷酸 52ml 酸，最后超纯水定容至500ml.过滤后置于棕色瓶
考马斯亮兰G250 0.035g 外加油皮纸保存（Bradford不稳定，一周内有效）
2.裂解液
尿素 8M
硫脲 2M
CHAPS 4%
DTT 60 mM
Tris-base 40 mM（如果有条件可以添加PMSF 0.5mM和5%的Pharmalate）
3. 水化液储液
尿素 8M
硫脲 2M
CHAPS 4%
Tris-base 40 mM
4. 分离胶buffer （pH8.8）250ml
SDS 0.4% 1g
Tris-HCl 1.5M 45.4275g
5. 浓缩胶buffer （pH6.8）100ml
SDS 0.4% 0.4g
Tris-HCl 0.5M 6.07g
6.凝胶储存液（30%的丙烯酰胺）250ml
Acr 29.2% 73g
Bis 0.8% 2g
7. 电极缓冲液（跑一次要配制2500ml）
甘氨酸 43.2g 36g
Tris 9g 或 7.5g
SDS 3g 2.5g
超纯水定容至3000ml 超纯水定容至2500ml
8. 0.5M Tris -HCl pH 6.8储液
6.1g Tris先用30ml超纯水溶解，再用46ml,3M HCl调pH6.8,再加水定容至100ml
9.平衡液储液
脲（即尿素） 36g
甘油 30% 30ml
SDS 1% 1g
0.5M Tris-HCl pH6.8 10ml 超纯水定容至100ml
10. 平衡液A（一根胶条）
DTT 20mg
平衡液储液 10ml
11.平衡液B（一根胶条）
碘乙酰氨 300mg
平衡液储液 10ml
0.05%溴酚兰 15ul （平衡液A、B均需临时配制）
12.0.5%琼脂糖10ml
琼脂糖 0.05g
电极缓冲液 10ml
溴酚兰 25ul
补：4、5、6的溶液需过滤后储存于4℃备用。
