组织的分离实验_EDTA 消化分离法
实验方法原理 | EDTA是一种非酶性消化物,常用不含Ca2+和Mg2+的BSS 配成0.02%的工作液。 关于EDTA的作用机制一般认为是:一些组织,尤其是上皮组织,在生存中需要Ca2+和Mg2+才能维持组织的完整性。EDTA能从这些组织生存环境中吸收这些离子,形成螯合物,能促进细胞相互分离。
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 用ETDA 和胰蛋白酶混合消化法传代的过程如下 1. 吸出培养瓶内营养液,注入EDTA(0.02%)和胰蛋白酶(0.25%)混合液(1:1),注入量以能覆盖细胞为度,置37 ℃温箱或室温中作用3 分~5 分钟。
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注意事项 | 1. 使用EDTA处理细胞后,因血清对其无中和作用,一定要用Hanks液产中洗液,因残留在培养液中的EDTA对细胞能产生不良作用。 |