Amicon® Pro蛋白纯化浓缩操作指南
蛋白从克隆表达到纯化脱盐浓缩，一路经过千山万水，宝贵的活性蛋白产量是很多人的“命根子”。然鹅，努力的我们还是苦恼的时候多，欣喜的时候太少太少～～
纯化黑科技，是时候放大招了
有没有什么好方法能让操作步骤少一点、再少一点，而同时蛋白的活性及产量损失也少一点、再少一点？？
让我们看看那些蛋白操作高手的秘密武器吧
——Amicon® Pro
由传统方法升级到革命性的Amicon® Pro纯化超滤系统，纯化、浓缩、换液从此不同。
真的能这样操作？？
视频：https://v.qq.com/x/page/q0378jlg84p.html
让我们一起来欣赏一下Amicon® Pro带来的蛋白纯化浓缩的流畅操作。
操作1
亲和纯化——多样本操作，更快更好
6次低速离心，总耗时~100分钟
（含65分钟孵育时间）
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1. 在Amicon® Pro上样池中加入200µL亲和纯化树脂（根据融合标签选择，50%悬浊液）
和1.5mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1min。
2. 加入0.5mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1h，其间可温和搅动促进结合。
3. 1,000×g离心1min 以去除未结合杂质。
4. 加入1.5mL漂洗缓冲液，1,000×g离心1min。
5. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。
6. 加入1mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5min。
7. 4,000×g离心15min。
8. 加上蛋白样品最终需要的缓冲液1.5mL。4,000×g离心15min，置换缓冲液的同时进行浓缩。
9. 倒转Amicon® Ultra 0.5mL超滤管，1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。
操作2
脱盐/缓冲液置换并浓缩——
20倍体积温和换液，效率大大提升
5次低速离心，总耗时~35分钟
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1. 在上样池中加入0.5mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1min。
2. 优化选做：加入1.5mL用于置换的缓冲液，1,000×g离心1min。
3. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。
4. 加入1.5mL样品，4,000×g离心15min进行浓缩。
5. 加入1.5mL需要置换的缓冲液，4,000×g离心15min，换液的同时进行浓缩。
6. 倒转Amicon® Ultra 0.5mL超滤管，1,000×g离心回收处理好的蛋白。
操作3
抗体标记——
操作步骤少、时间节省而抗体得率高
5次低速离心，总耗时~50分钟
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1. 在上样池中加入0.5mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1min。
2. 加入抗体样品
• 对于比较稀释的样品（< 1mg/mL）
- 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管（建议使用50kDa）。
- 加上至多1mL抗体样品， 4,000×g离心15min。
• 对于浓度较高的的样品（ 1mg/mL）
- 在Amicon® Ultra 0.5mL超滤管（建议使用50kDa）中加入至多100µL样品。
- 将装有样品的Amicon® Ultra 0.5mL超滤管接在Amicon® Pro上样池的下端。
3. Amicon® Pro上样池内加入预先准备好的1.5mL含有染料的反应混合液。
4. 4,000×g离心15min。
5. 优化选做：将样品在室温下多孵育30 min。
6. 上样池中加入1.5mL PBS± NaN3。
7. 4,000×g离心15min换液同时浓缩。
8. 倒转Amicon® Ultra 0.5mL超滤管1,000×g离心回收标记好的抗体。
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