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锚定酶消化cDNA实验

2020.8.10

试剂、试剂盒 溶液与缓冲液引物

仪器、耗材 试剂盒MPC-EPCR仪Gene PulserII 型系统

实验步骤

实验方案 A


1.通过加入下列物质来消化双链 cDNA


2.在 37°C 下消化 lh。


3.65°C 孵育 20 min 热失活限制性酶。


4.等体积 PCI 抽提后乙醇沉淀(实验方案 A, 第 2 步)。


5.将冲洗风干的沉淀重新悬浮于 20 ul LoTE 中。


6.继续进行第 4 步


实验方案 B


1.从试管中移去第二股链反应混合物,并用 50ul 洗液洗涤 1 次,然后移去洗液。


2.用 50ul 的 1x 限制性缓冲液洗涤试管 1 次


3.移去缓冲液,然后加入:


4.在 37C 下消化 lh。


5.通过在 65℃ 下放置 20 min 热失活限制性酶。


6.继续进行第 5 步。


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