重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作（细菌内...
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作（细菌内同源重组AdEasySystem）
实验材料 腺病毒
试剂、试剂盒 PmeI酶琼脂糖LB培养基甘油液氮SOC卡那霉素PacI酶Lipofectamine无血清培养基DMEM完全培养基PBSCsCl病毒裂解上清液矿物油
仪器、耗材 恒温摇床分光光度计恒温水浴锅EP管低温离心机电转杯电转仪方瓶96孔板37℃孵箱–80℃低温储藏箱透析袋
实验步骤
一、目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例）
1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV 质粒多克隆位点。
2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。
3. 重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。
4. 用PmeI 单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。
5. 胶回收线性化质粒，以备共转化使用。
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