药品中一般杂质检查项目-砷盐检查法
砷盐多由药物生产中使用的无机试剂及搪瓷反应器引入,砷为毒性杂质,须严格控制其量。
1.古蔡氏检砷法
(1)原理
金属锌与酸作用产生新生态氢,将药物中微量砷还原为砷化氢,当砷化氢气体遇溴化汞纸时,根据含砷量不同产生黄色至棕色的砷斑,与同一条件下定量标准砷溶液所生成的砷比较判定供试品砷盐是否符合限量规定。
(2)操作方法
①标准砷斑的制备 精密量取标准砷溶液2ml,置A瓶中,加盐酸5ml与水21ml,再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置10min后,加锌粒2g,立即将照上法装妥的导气管密塞于A瓶上,并将A瓶置25~40℃水浴中,反应45min,取出溴化汞试纸,即得。
若供试品需经有机破坏后再行检砷,则应取标准砷溶A液代替供试品,照该药品种项下规定的方法同法处理后,依法制备标准砷斑。
②检查法 于导气管中装入醋酸铅棉花60mg(装管高度为60～80mm),再于旋塞的顶端平面上放一片溴化汞试纸(试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜),盖上旋塞盖并旋紧。取按各药品项下规定方法制成的供试液,置A瓶中,照标准砷斑的制备,自“再加碘化钾试液5ml”起,依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较,不得更深。
(3)测定条件
①标准砷溶液的制备称 取三氧化二砷0.132g,置1000ml量瓶中,加20%氢氧化钠溶液5ml溶解后,用适量的稀硫酸中和,再加稀硫酸10ml,用水稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。临用前,精密量取贮备液10ml,置1000ml量瓶中,加稀硫酸10ml,用水稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml相当于1μg的As)。
②标准砷斑应用2ml标准砷溶液制成。药物含砷限量不同,可按规定限量改变供试品取用量,不可改变标准砷溶液取量。
③因为As5+生成砷化氢的速度慢,在反应液中加入还原剂酸性氯化亚锡及碘化钾,将供试品中可能存在的As5+还原为As3+;氧化生成的碘又被氯化亚锡还原为碘离子,与反应中产生的锌离子形成稳定的络离子,使生成砷化氢的反应不断进行。
④供试品及锌粒中可能含有少量硫化物,在酸性条件下将产生硫化氢气体。该气体遇溴化汞试纸生成硫化汞色斑,产生假阳性,干扰试验结果。采用醋酸铅棉花,可预先吸收硫化氢,避免其与溴化汞试纸作用。醋酸铅棉花用量太少,可能除不尽硫化氢,太多或塞得太紧会阻碍砷化氢的通过。所以药典规定取醋酸铅棉花60mg,装管高度为60～80mm,这样即使在1000μg硫存在下也不干扰测定。
(4)注意事项
①若供试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等,在酸性溶液中生成硫化氢或二氧化硫气体,与溴化汞作用生成黑色硫化汞或金属汞,干扰比色。应先加硝酸处理,使氧化成无干扰的硫酸盐,过量的硝酸及产生的含氮氧化物应蒸干除尽。
②供试品若为铁盐,不仅消耗还原剂,影响测定条件,且能氧化砷化氢。应该先加酸性氯化亚锡试液,将Fe3+还原为Fe2+,再依法检查。
③供试品若为强氧化剂或在酸性溶液中能产生强氧化性物质者,如亚硝酸钠在酸性溶液中能产生亚硝酸和硝酸,不仅消耗锌粒且产生含氮的氧化物氧化新生态的氢,影响砷化氢的生成。因此,需加入硫酸先行分解后依法测定。
④具环状结构的有机药物,因砷可能以共价键与其结合,需进行有机破坏后再检查,常用的有机破坏法有碱破坏法和酸破坏法。
若供式品需经有机破坏后再行检砷,则制备标准砷斑时,应取标准砷溶液2.0ml代替供试品,照各品种项下规定的方法同法处理后,依法制备标准砷斑。
⑤砷斑遇光、热及湿气则褪色。如需保存可将砷斑在石蜡饱和的石油醚溶液中浸过晾干或避光置于干燥器内,也可将砷斑用滤纸包好夹在记录本中保存。
2.二乙基二硫代氨基甲酸银法(Ag-DDC)
该法不仅可用于限量检查,也可用作微量砷盐的含量测定。
(1)原理
金属锌与酸作用产生新生态氢,与微量砷盐反应,生成具挥发性的砷化氢,砷化氢与二乙基二硫代氨基甲酸银(Ag-DDC)作用,游离出银,此胶态的银呈红色,与同条件下一定量标准砷溶液所产生的颜色比较,或在510nm波长处测定吸光度,以判断砷盐限量。
(2)操作方法
①标准砷对照液的制备 精密量取标准砷溶液5ml,加盐酸5ml与水21ml,再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置10min后,加锌粒2g,立即将导气管与A瓶密塞,使生成的砷化氢气体导入另一D管中,并将A瓶置25～40℃水浴中反应45min,取出D管,添加氯仿至刻度,混匀,即得。
若供试品需经有机破坏后再行检砷,则应取标准砷溶液代替供试品,照各药品项下规定的方法同法处理后,依法制备标准砷对照液。
②检查法 于导气管中装入醋酸铅棉花60mg(装管高度约80mm),并于D管中精密加入二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml。取照各药品项下规定方法制成的供试液置A瓶中,照标准砷对照液的制备,自“再加碘化钾试液5ml”起,依法操作。将所得溶液与标准砷对照液同置白色背景上,从D管上方向下观察、比较,所得溶液的颜色不得比标准砷对照液更深。必要时,可将所得溶液转移至1cm吸收池中,用适宜的分光光度计或比色计在510nm波长处以二乙基二硫代氨基甲酸银试液做空白,测定吸收度,与标准砷对照液按同法测得的吸收度比较,即得。
