用比较基因组杂交描述染色体结构异常实验（一）
实验方法原理 比较基因组杂交（CGH)是一种能够在一步全基因组筛查程序，描述G带不能发现的细胞遗传物质增加或减少的分子细胞遗传学技术。CGH优于进行全染色体涂染（wcp)的常规荧光原位杂交（FISH)和多色FISH之处，是它不仅能够识别增加的未知片段的染色体来源，而且还可将该片段定位于特定的染色体区带。采用各种探针进行HSH来确定增加的染色体片段的来源，这个过程昂贵且费力，因为在识别出染色体来源之前，可能需要多种wcp探针。另外，能够得到的位点特异性探针的数量也有限，仅能覆盖基因组的一部分。
实验材料 抽取核型正常男性的外周血牛血清白蛋白
试剂、试剂盒 新鲜配制的固定液秋水仙胺 PRMI胎牛血清青霉素链霉素L-谷氨酰胺植物血球凝集素HEPES缓冲液KClDulbecco 磷酸缓冲液胸苷溶液启动培养基连续培养基福尔马林固定液荧光素-2-dUTP德克萨斯红-5-dUTP整套 dNTP 2-疏基乙醇dNTP 混合物TAE溴化乙锭琼脂糖凝胶
仪器、耗材 巴斯德吸管染色缸PureGene DNA 纯化试剂盒水浴锅
实验步骤
一、正常男性外周血细胞的培养
1.将核型正常男性的500〜650μL新鲜全血加入10mL启动培养基中。
2.37℃条件下培养约72h(3d)。
3.加入200mL胸苷溶液，轻轻混匀。
4.37℃培养14〜18h(过夜)。
5.155g离心10min。
6.弃去上清，加入10mL 1×PBS，颠倒混匀。
7.155g离心10min。
8.弃去上清，加入10mL连续培养基，轻轻颠倒混匀。
9.37℃条件下继续培养4〜5h。
10.加入6或7滴秋水仙胺溶液，颠倒混匀。
11.37℃水浴锅中培养20min。.
12.170g离心10min。
13.弃去上清，留约0.5mL液体。轻弹离心管几次，彻底重悬细胞，避免细胞结块。迅速加入0.5mL 75mol/L KCl(预热在37℃)，轻弹离心管充分混匀，继续加入4.5mL KC1。
14.37℃水浴锅中孵育15min。
15.用巴斯德吸管，向每个管中从管底开始缓缓加入1mL新鲜配制的固定液，轻轻颠倒混匀。
16.170g离心10min。
17.弃上清，残留约0.5mL液体。
18.边混匀边逐滴加入新鲜固定液至5mL。
19.室温孵育约10min。
20.170g离心10min。
21.弃去上清，残留约0.5mL液体，将沉淀打散。
22.边混匀边逐滴加入新鲜固定液至5mL。
23.必要的话，再重复步骤20〜22，2或3次。
24.弃去上清。
25.稀释沉淀至适当浓度。溶液应混浊、轻雾状（如果得到沉淀较多，加入1〜1.5mL固定液；如果得到沉淀较少，加入<1mL固定液）。
26.按下述二所述方法滴片。
