转基因小鼠模型的建立(SOP)-2
[不足之处]
（1）外源基因随机整合；
（2）个别原核不清晰，需进行特殊处理；
（3）需大型精密仪器，费用昂贵；
（4）操作周期相对较长。
（二）实验器材的准备
1．输精管切除术用器材：弯式有齿镊、直式有齿镊、显微镊、手术剪、自动小
夹涂药器、自动小夹、带弯针4/0丝线及持针器、直径为10cm塑料 Petri氏
培养皿（内盛70%乙醇）。
2．手术前麻醉
2，2，2 三溴乙醇（阿佛丁）是相当有效的麻醉剂。因该试剂对光敏感，所以应该于4度避光保存，新试剂用前应进行测试。经腹腔注射三溴乙醇麻醉小鼠后，为了使麻醉剂尽快发生作用，将小鼠放回原笼熟悉的环境中，小鼠将会更容易松驰下来。 挤压小鼠脚垫，如果小鼠能感觉到此刺激，小鼠将从挤压部位开始缩腿运动（pedal reflex），用此方法可以检察是否麻醉完全。实验中小鼠无缩腿运动、小鼠达到手术所需的麻醉深度以及程度方可开始手术。
三溴乙醇的反复使用可能引起小鼠腹膜刺激征或者炎症反应。其他麻醉剂中，克他命/甲苯噻嗪在兽医界广泛应用，另外，克他命/美托咪定也越来越受到青睐，特别是在美国。我国一些实验室用戊巴比妥钠的效果好,特别是尾静脉注射控制很方便.30g左右小鼠用0.85%的戊巴比妥钠0.3ml左右。
3．受精卵的采集用器材：70%乙醇、手术剪、10mL解剖剪、手术镊、M2溶液（Sigma）、小玻璃皿等。
4．离体输卵管中受精卵收集用器材：二氧化碳孵育箱、眼科镊子、5号镊子、
无菌30-mm组织培养皿、解剖显微镜、透明质酸酶、移液管、工作液、M16溶液（Sigma）、3ml注射器等。
5．DNA显微注射用器材
（1） 受精卵的收集与移动用器材：巴氏移液管、酒精灯、特制吸管、玻璃刀等。
（2） 凹玻片准备：一块标准的凹型载玻片（硅化）、矿物油（Sigma）、工作液等。
（3） 注射设备的设置：微型水力驱动设备、Hamilton Gas-Tite?注射器（250 ?l）、
Intramedic?管道系统（外径1.27mm，内径0.86mm）、两只玻璃管道连接头、三通管连接器、一只带接头的60ml塑料注射器、一只器械套管、矿物油等。
（4）受精卵的显微注射用器材：凹玻片（显微注射用）、倒置立体相差显微镜
或倒置Nomarski立体光学显微镜、显微操纵器、千分尺（连接添满矿物油，且耐气构造的250?l汉密尔顿注射器）、气压装置(50ml充满气体的注射器) 、持卵管、预载DNA的注射针等。
6．输卵管转移的准备
（1） 手术试剂器材：麻醉剂（阿佛丁或可他命/甲苯噻嗪）、70%乙醇、一副钝性齿镊、两副5号精细镊子、一副10cm手术剪、带自动小夹的金属大剪、一个小弹簧夹、外科缝线、解剖显微镜、纤维光学照明器、载针头的1ml注射器、kimwipe绵纸或外科纱布、9cm 塑料皿、工作液、移液管和手动移卵管等。所有的手术器械在使用前应该彻底清洗，70%乙醇消毒或高热灭菌处理。
