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转基因小鼠模型的建立(SOP)-8

2019.9.02

(1)  RNA的分离:根据实验者的需要从转基因小鼠组织或细胞中提取总RNA或mRNA。分离总RNA比较简单,且适合做基因做基因转录分析。实验操作参见第一章的第四节。

(2)  Northern 印迹分析:该技术用于定性检测转基因动物组织或细胞中转基因转录的相对水平。其实验操作参见第一章的第九节。

(3)  RT-PCR检测:该技术可定量或半定量检测转基因小鼠组织或细胞中转基因特异表达的mRNA,且非常敏感,Northern 印迹未能检测到的转录子,该技术亦可检测到,甚至可测出1000个细胞中的一个拷贝的转录子。其实验操作参见第三章第一、二节。

(4)  Western 印迹分析:该技术通常用于转基因小鼠组织或细胞中转基因编码蛋白的表达水平。其实验操作参见第一章第十节。

(5)  免疫组织化学分析:该法可检测转基因编码蛋白表达在转基因小鼠中的组织分布。有多种实验方法,可参看相关的免疫学检测技术书籍。

附录:特殊实验溶液的配制

1. M16溶液:

称取 0.5534 g NaCl,0.0356 g KCl,0.0162 g KH2PO4,0.0294 g MgSO4?7H2O, 0.0252 g CaCl2?2H2O,0.32 ml乳酸钠(60% 糖浆),0.0036 g丙酮酸钠, 0.1000 g D-葡萄糖,0.0010 g酚红,0.2106 g NaHCO3。溶于100ml超纯水,0.22?m滤膜过滤除菌,分装后40C储存不超过3周,加入4 mg/mL BSA可立即使用。

2. M2 溶液:

称取0.5534 g NaCl, 0.0356 g KCl, 0.0162 g KH2PO4, 0.0294 g MgSO4?7H2O,

0.0252 g CaCl2?2H2O,0.32 ml 乳酸钠(60% 糖浆), 0.0036 g丙酮酸钠, 0.1000 g D-葡萄糖,0.0010g酚红 0.0337g NaHCO3, 0.5000g HEPES。定容于100ml超纯水,0.22?m 滤膜过滤除菌,分装后40C储存不超过3周。M2用于孵箱外卵的操作,用HEPES调节pH,加入4 mg/m BSA可立即使用。

3.工作液:无丙酮酸钠的高糖(4500 mg/mL)DMEM。具体配制见说明书

4.注射缓冲液:10 mmol/L Tris-HCl/0.1 mmol/L EDTA, 调节pH 为7.5.


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