大鼠痛觉模型的建立方法,Alzhermer病的动物模型,大鼠神...
大鼠痛觉模型的建立方法,Alzhermer病的动物模型,大鼠神经功能缺损的详细评分标准
| 大鼠痛觉模型的建立分为下面几个步骤：1、领取SD雄性大鼠，体重200-220g为宜。2、试验前测试痛阈（作者采用仪器为意大利Ugobasile的heat-flux meter测痛仪），痛阈极端大/小的挑除不用。3、试验前至少3天每日上午9点－9点半将大鼠放入观察笼中适应环境。4、试验时用微量注射器抽取100-200ul甲醛（浓度可自己定）于大鼠下肢脚掌皮内注射，注射后留置针头约30－60秒。5、试验时，将大鼠放入观察笼，摄像，人员必须全部离开。6、以大鼠抬足和舔舐足掌为指标记录相关数据。注意事项：大鼠饲养时要勤换垫料（最好每天换）。如果有大鼠胃肠不好，要及时用庆大霉素给予治疗，因为大鼠的健康状态对其行为影响甚是明显。为保证试验结果的准确性，空调应24h开放，保证室内温度22℃左右（环境温度小于16℃大鼠的行为明显改变！）并且确保每天能够光照12h。 |
| SD大鼠200-250克。用3%戊巴比妥钠(35-40mg/kg体重)腹腔麻醉动物后，固定在脑立体定位仪上(参照大鼠全脑立体定位图谱)，以前囟为零点，选出进刀坐标：前后坐标(AP)1.8mm，中线旁开(L)坐标1.0mm，腹侧坐标(v)4. 0mm。首先用牙科钻在上述坐标的钻孔开骨窗，去除颅骨，挑开硬脑膜，用自制双刃不锈钢刀片(宽2mm，厚0.1mm)按上述坐标从脑冠状面插入脑内。然后，将刀向外移动1.5mm，再降刀1mm，并上下抽刀10余次，以完全切断弯窿海马伞。最后将刀片退至L1.0mm处，抽出刀片。动物分组1. 实验组：10只，按上述方法切断左侧穹窿海马伞；2. 假手术组：10只,开颅并挑开硬膜膜，切断皮质，但不切断穹窿海马伞，最后缝合头皮；3. 空白对照组：10只，做水迷宫行为学检测和电生理检验。以Morris水迷宫行为学检测。（提供两种数据）定位航行能力。 |
大鼠神经功能缺损的详细评分标准
1．神经行为评分
在梗死后24 h,按照Masao Shmi izu-Sasamata的方法[3]对所有大鼠进行神经行为评分,评分标准包括:①自主活动的程度,②左前肢偏瘫,③提尾时左前肢伸不直,④抗侧推能力,⑤向左倾斜度,⑥向左环行度,⑦对触须的反应。以上指标无异常为0分,中等异常为1分,严重异常为2分,将各项评分相加,总分为0~14分。
2．动物行为学评定
①0分:无神经损伤症状;
②1分:不能完全伸展对侧前爪;
③2分:向瘫痪侧转圈;
④3分:向对侧倾倒;
⑤4分:不能自发行走,意识丧失。
3．大鼠神经损伤严重缺损评分（Neurological Severity Scores,NSS）：
0分:神经功能正常;
1分:轻度神经功能缺损(提尾时左前肢屈曲);
2分:中度神经功能缺损(行走时向左侧转圈);
3分:中度神经功能缺损(向左侧倾斜);
4分:无自发行走，意识减退;
5分:与缺血有关的死亡。
4. 平衡木试验(Beam Balance Test, BBT):
把大鼠置于一宽1.5cm的木条上。木条一端悬空，另一端固定于一块40x40cm的平板中心，以防止大鼠从木条上爬到桌面上使实验失败。木条下备有软垫以防大鼠掉下时跌伤。根据2分钟内大鼠的平衡能力行神经学评分。正常大鼠的平衡能力在1-2分钟。
平衡试验评分标准：
1在木条上站稳，无摇晃，持续2分钟
2在木条上站稳，左右摇晃，未滑下，持续2分钟
3在木条上站立，下滑至一侧，未掉下，持续2分钟
4在木条上站立不到2分钟即从木条上掉下
5试图在木条上站稳、但在数秒钟即掉下
6无任何站立能力
5. 抬高身体摇摆试验（Elevated Body Swing Test, EBST）：
用于测量运动不对称，EBST测量时首先用手提起大鼠的尾根部，大鼠头部悬垂距平面5cm左右，这时大鼠头部会向左侧或右侧旋转，向单测旋转的角度大于100时为计数的标准，记录旋转的方向和角度，一次试验后让大鼠休息1min，再进行下一次实验，重复试验20次，记录总的次数和方向。
6. 一次性被动回避平台试验(Step-down Passive Avoidance Test, SDPAT)是一种用于研究记忆的简单行为模型，主要适用于研究记忆的巩固( memory consolidation)和记忆的保持(memory retention)。该模型含有一定的空间记忆成份，试验箱是一个长方形的封闭空间，高为60cm，箱内有一较小的平台9 cm X 9 cm, 高出底面约2 cm，动物只能不十分舒服地坚持在平台上，如跑下平台(铜棒，通电，30 V)即遭到电击。训练过程是这样的:首先把动物放在平台上，大鼠一般在平台上只能停留几分钟，就会跑下来，但由于底面的金属条是通电的，大鼠在寻找一段时间后，能够找回平台。这时第一次试验结束，24 h后，再次把大鼠放在平台上，这时底面的金属条并不通电，记录大鼠在平台上滞留的时间，根据测试间隔时间的长短和在平台上滞留时间的多少来判定大鼠对上次电击的记忆保持能力。
7. 水迷宫试验(Water Maze Test, WMT)：
用于测量大鼠空间学习能力。每组于移植后的第7周进行。在相同室温（25±2）0C和象限条件下，将3组动物连续训练4d，2 次/d，每次限定时间为120s，超过120s 仍找不到平台者记为未找到平台，2 次间隔为10min，第5天测试。
