高架十字迷宫和强迫游泳实验相关：催产素对大鼠应激...
高架十字迷宫和强迫游泳实验相关-催产素对大鼠应激模型母性攻击行为的影响
【摘要】 目的探究不同剂量的催产素对于Wistar孕鼠应激模型攻击行为的影响。方法将40只孕鼠按随机数字表分为实验组(A、B、C)与对照组(D)，每组10只；其中，A、B、C三组每次强迫游泳应激前分别经腹腔给予o．3 mg／kg、1．0 rag／kg、2．0 mg／kg的催产素，D组给予等体积生理盐水。各组待分娩第3天均进行母性攻击行为测试，主要观察母鼠的攻击总数、撕咬次数、攀压次数、攻击潜伏期、攻击持续时间等项目，比较各组攻击行为的差异，并用高架十字迷宫对各组大鼠在开臂、闭臂的相关数据进行分析比较。结果A组与D组在攻击持续时间和潜伏期方面有差异统计学意义[(147．60+23．92)s、(79．70_+9．88)s，P<0．05]，其他项目无差异统计学意义(P>0．05)；B组与D组除攻击总数(P>0．05)外其他均有差异统计学意义『(3．10_+0，87)次、(13．60_+5．14)次、(91．30+9．74)s、(167．20_+30．02)s，P<O．01]；C组与D组各指标均有差异统计学意义[(6．40±1．34)次、(15．10+4．35)次、(23．70_+3．46)次、(49．80±5．53)s、(215．60+39．55)s，尸<0．叭]；A组与B组各指标有差异统计学意义(P<0．05)；B组与C组除攀压次数(P>0．05)，其他均有差异统计学意义(P<O．01)。在高架十字迷宫中，A组进入开臂次数百分率和进入开臂时间百分率较D组均差异有统计学意义(百分率数值分别为o．47±0．13、0．13±0．05，P<0．01)，B组与D组差异统计学意义(P<0．01)，A组与B组差异有统计学意义(P<0．05)，B组与C组在进入开臂时间百分率中无差异统计学意义(P>0．05)。结论 催产素可正性调节应激对母性攻击行为的影响，改善母仔亲密性，且催产素在此过程中具有剂量依从性。
【关键词】应激模型；焦虑；催产素；母性攻击行为；高架十字迷宫
应激(Stress)，又称应激反应，广泛存在于一切生物体中。实验和临床研究证实，应激可以诱发多种行为的改变，如焦虑、抑郁、逃避／攻击行为异常等；另外，应激还可激活神经内分泌系统，继而引起糖皮质激素和儿茶酚胺水平显著增高以及催产素少量的增加。催产素(Oxytocin，OXT)，又叫缩宫素，主要是由视上核和室旁核大细胞神经元合成的一种九肽神经内分泌激素，并通过下丘脑．垂体．性腺轴作用于中枢神经系统和外周神经系统，除了最为常见的促进子宫收缩和泌乳作用之外，最新国内外研究发现，还具有凋节社交、母性行为、抗应激的作用，而且孕妇体内催产素的含量与子女的亲密度有很大的关联性，因此，国外学者又称其为“亲密激素”。而母性攻击行为(maternal ag—gression，MA)是近些年来国内外继母爱行为研究之后又一复杂的行为学名词，是指啮齿类动物为了防御潜在的入侵者对幼崽构成的威胁而发挥的一种保护性行为反应，与母性行为密切相关引。据研究发现，MA与应激反应有关，并主要由体内的催产素进行调节，从而维持着种群的稳定和健康发展。本实验通过强迫游泳建立孕鼠应激模型，进而研究MA的改变，并通过注射不同剂量的催产素来探讨其是否可以通过抗应激来起到保护MA的作用。
材料与方法
一、材料
1．实验动物与药品：健康清洁级Wistar孕大鼠40只，体质量(260+30)g，大连医科大学实验动物中心提供，合格证编号：SCXK(辽)2008—0002，标准环境饲养。按照随机数字表将40只孕鼠随机分为A、B、C、D四组，每组10只。性成熟雄鼠20只，体质量(250+_25)g，作为人侵鼠。专用Wistar大鼠催产素注射液、o．9％生理盐水由佳木斯大学生命科学中心行为学实验室提供。
2．实验仪器（由上海欣软信息科技有限公司提供）：(1)强迫游泳筒：圆柱状简规格30 cmx50 cm(直径×高)，水深40cm。(2)攻击行为实验箱：规格61 cmx 4lcmX51 cm，上方覆盖两块透明玻璃板，里面均匀铺上一层约l ctn厚的干燥木屑。(3)高架f字迷宫：由--x寸开臂(50 cmX10 cm)、一对闭臂(50 cm×10cmX40cm)和一个中央区(10cmxl0cm)组成。迷宫距地面50 cm。迷宫的底面和闭臂的墙面是由黑色的塑胶板构成的。
二、方法
1．造模：参照经典强迫游泳造模方法进行一。于孕期第14日至分娩当日期间，在造模前分别给予A、B、C三组孕鼠腹腔注射0．3 rag／kg、1．0 111静7kg、2．0 mg／kg催产素，D组给予等体积的生理盐水。注射10 min后，将大鼠放人设定温度(19～21℃)的强迫游泳筒内游泳10 min，每次游泳完毕后擦干，直接放回干燥的窝笼中。
2．行为学检测(1)母性攻击行为实验：在安静自然光线下进行，每次实验前把母鼠和幼崽放入攻击行为实验箱内适应2 nlin，之后将入侵鼠放入箱内，开始视频拍摄10 rain。观察指标如下：攻击总次数、攻击潜伏期、攻击持续时间、撕咬次数、攀压次数。(2)高架十字迷宫实验：在安静黑暗的房间进行，先打开迷宫l：方100 cm处的的白炽灯；将母鼠放入实验箱适应5 min后，放入迷宫指定位置检测5 nlin(待放鼠于迷宫前10 s打开拍摄系统正式开始检测)。观察指标有常规指标和相关探究．危险评估指标。前者主要有进入开臂次数(open arm entry，OE)、进入开臂时间(openarm time，OT)、进入闭臂次数(C|ose arnl entry，CE)、进入闭臂时问(closearm time，CT)、OE百分率、OT百分率。后者主要有向下探究次数(head dipping，HD)、闭臂内后腿直立次数(rearing，RE)、伸展一注意行为次数(stretch—attend postures，SAP)。
3．统计方法：计数资料以均数±标准差表示，使用SPSS 17．0统计软件对实验数据进行方差齐性检验、单因素方差分析(One．way ANOVA)，组间比较用LSD．t检验及SNK-q检验。以P<0．05为差异有统汁学意义。
讨 论
有关攻击行为的实验研究已有相应的报道，但数据并不完全一致，这可能与大鼠种群、刺激强度和时间、给药方式、检验设备精密度等多种因素有关。本研究通过强迫游泳复制经典应激模型，继而通过催产素(OXT)进行干预，从而诱导应激后的异常母性攻击行为(MA)趋于正常化或减轻其应激症状进而促进其MA的发展。
在MA实验中，观察发现，生理盐水对照组在撕咬次数、攀压次数、总攻击次数、攻击潜伏期均有不同程度下降，这说明应激会破坏母鼠还击入侵鼠的能力(在实验中可见，入侵者在踩压仔鼠时母鼠反应迟钝)，符合之前的文献报道；而给予不同剂量的OXT后，应激状况不同程度改善，这也与已有的报道一致。但是至于是攻击总数增多为主还是撕咬次数增多为主，目前尚无定论，亦有追逐次数增多为主的报道，这说明衡量攻击行为的质量缺乏一定的标准。此外，生理盐水组在实验过程中可见食崽发生，从而直接导致了鼠崽数量的急剧下降，进而影响了母鼠的嗅觉反应和警觉反应，使得护仔能力大大降低，而干预组却可以有效地降低食崽性，这是以前的报道提及甚少的，这或许与OXT的社会关系(增强彼此信任亲密关系)作用有关。本研究发现，在撕咬次数、攻击持续时间、攻击潜伏期方面，A、B、C组之间差异有统计学意义，说明OXT对于应激后的MA保护作用可能具有一定的剂量依从性；至于OXT剂量是否可以继续增加，需要考虑毒理学意义(OXT副作用主要为血压升高、脉搏加快、水潴留等)，国内外文献在啮齿类动物研究中也提及甚少。事实上，在MA中也伴随着母爱行为的发生，从而保证了幼崽的存活率以及物种的延续性。
凭借EPM发现，D组OT百分率和OE百分率明显小于A组，进入闭臂时间(CT)也明显延长，说明OXT可能有增加应激鼠进入开臂的作用。而通过OXT进一步注射(尤其是B组)发现，OT、OE、OT百分率、OE百分率明显提高，说明OXT具有一定的抗焦虑抗应激效应和剂量依从性，这也可能与MA和强迫游泳双重应激中OXT诱发的氨基酸(如GABA和谷氨酸)释放增加或者是抑制了促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)以及相应受体2(CRFR．2)的结合而发挥上述作用的，而后者被视为OXT发挥抗焦虑和不断适应应激环境的重要因素之一。此外，也有文献报道，垂体后叶素(AVP)、雌激素受体和睾酮、5．HT、多巴胺等激素蛋白以及相应的大脑核团(如伏隔核、海马)也可能参与OXT的抗应激生理作用。相对比B、c组而言，A组的实验指标的提高程度虽小，但仍具有差异，这可能与OXT在血浆中的半衰期较短有关(大约3～10rain)。除此之外，根据Alica等人。制定的EPM使用规范，EPM还可检测和评估与探索．危险有关的指标即HD、RE、SAP的次数，以此更全面地反映大鼠在开臂、闭臂、中央区的活动性、应对危险(如本实验中的MA)以及应激程度，这已在国内外文献中得到证实。D组HD、RE、SAP数量明显少于c组，HD较A组也明显减少，RE、SAP与B组差异显著，说明应激大鼠的焦虑应激程度不仅与开臂区m-JI盲q次数比例有关，而且还与探索、应对危险行为之间存在着相关性，这在MA中得到了很好的体现。
总之，强迫游泳所引起的应激反应会破坏分娩后母鼠的母性行为的固有组分，即母爱行为(如建穴、叼仔、舔仔、梳理毛发、n甫乳等行为表现)和MA，并且对于MA的行为改变或生理心理冲击(引发焦虑、抑郁、溃疡性出血等)更大，这与国外文献报道相一致。通过给予不同剂量的OXT可以对上述行为起到有效的干预或行为补偿作用，而OXT对于MA的保护作用机制目前尚不明确，有待于进一步从分子学、基因学、心理学等方面着手探究。实验中的确发现母子亲密性提高，这可能是OXT治疗的前景，可以保证种群的生存率。所以设想是否可以给那些母子关系不和谐的其他物种以至于人类一定的OXT，还需大量基础和临床实验数据来确定。
