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目前测定网织红细胞的方法主要有哪些?相关性如何?

2021.6.09

目前网织红细胞检测方法主要有传统的显微镜计数方法和具有网织红细胞分析功能的全自动血细胞分析仪上测定两大类。当然还可以用流式细胞分析仪进行测定,但往往不适宜临床实验室常规使用;还曾有过专门用于网织红细胞计数的专用仪器,但现在血细胞分析仪已经具有这项功能,所以专用网织红细胞分析仪器已经很少发展和很少用户在使用。

显微镜法网织红细胞计数方法如下:

试剂配制:10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液

煌焦油蓝 1.0 g

柠檬酸钠 0.4 g

氯化钠 0.85 g

蒸馏水 加至100ml(过滤后备用)

操作步骤:①取干净小试管一只,加入10g/L煌焦油蓝溶液2~3滴,然后加入等量的血液。混匀后放置15~20min,使红细胞充分染色。②取少许染色好的血液,在洁净载玻片上推成薄而均匀的血膜。③干燥后用瑞氏染液复染(也可不复染)。④在显微镜低倍镜下选择细胞分布均匀,着色清晰的部位,用油镜计数1000个红细胞内网织红细胞数再除1000计算出网织红细胞百分数。严重贫血病人,应计算网织红细胞的绝对值(网织红细胞百分数×每微升内的红细胞数)。

窥盘计数法:为准确计数,提供计数精密度,可使用米勒(Miller)窥盘辅助(米勒窥盘)。米勒窥盘是一种安装于显微镜目镜中的装置,其上具有大小两个方格,其面积之比为9:1。血片的染色和制片同于上述的方法,计数时将血片放置在显微镜上,使用窥盘上的小方格计数红细胞数量,大方格用于计数网织红细胞数量;当小方格内红细胞总数超过111个时,即表明计数红细胞总数已经超过1000个,此时将所计数到的网织红细胞总数累积,经过计算即可得到网织红细胞百分比。

仪器法和传统的显微镜法计数原理和做法各不相同,显微镜法是直接法,可以直接观察到网织红细胞。但是因为操作和计数过程完全依据人的能力而定,且计数的细胞数量有限,还有染色情况、染色比例、细胞分布情况、个人能力问题等诸多的不确定因素和不标准化问题,因此计数上的精密度和准确性受到一定的影响。但是这种方法在没有自动化设备的医院,在基层医院,在严格制定操作规范和对操作者严格培训的条件下,是可行的实验方法。而自动化仪器在许多方面具有标准化程序,试剂稳定、反应时间一致、计数细胞数量大(一般计数RBC数量在10000~50000)、具有质控和校准能力,因此在精密度和准确性上明显优于显微镜计数法。但是当仪器在出现报警信息、散点图异常等情况下,要认真分析原因,必要时需要通过显微镜法进行核实,才是比较稳妥的做法。我自己曾经遇到过一例非常高的网织红细胞计数结果,因为仪器测定得到的网织红细胞是43%,这样高的结果有些不敢相信,因此做了网织红细胞染色涂片镜检。结果所见到的网织红细胞数量确实非常高,验证了仪器分析所得到的结果。(图2-高网织红细胞显微镜图)


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