蛋白质组学几种定量方法的案例解读（二）
经典案例
题目：A tumour suppressor network relying on the polyamine-hypusine axis（一种基于多胺Hypusine轴（Polyamine-hypusine axis）的新型肿瘤抑制网络）
期刊：Nature
主要技术：iTRAQ定量
文章摘要：为寻找淋巴瘤的抑癌基因，首先通过筛选短发夹RNA文库的方法，识别出一些抑制后会引起小鼠淋巴瘤模型肿瘤扩增的基因。然后采用iTRAQ定量技术对两个有意义的淋巴瘤抑癌基因——AMD1和Eif5A的表达调控进行研究，发现这两个基因都与Hypusine(Hypusine是一种独特的氨基酸，由一种高保守途径产生的多胺代谢产物)相关。通过进一步的二次筛选，确定了多胺Hypusine轴的新型抑癌基因网络，这一网络能调控细胞凋亡。
图：iTRAQ定量流程和蛋白质比值分布图
Scuoppo C, Miething C et al. A tumour suppressor network relying on the polyamine-hypusine axis. Nature.
文献来源：Scuoppo C, Miething C, Lindqvist L, Reyes J, Ruse C, Appelmann I,Yoon S, Krasnitz A, Teruya-Feldstein J, Pappin D et al: A tumour suppressor network relying on the polyamine-hypusine axis. Nature2012, 487(7406):244-248.
三、SILAC定量
SILAC（Stable Isotope Labeling Strategies,稳定同位素标记技术）为全面、系统地定性和定量分析复杂哺乳动物细胞蛋白质组提供了有效的方案。
SILAC的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(中性或重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经5-6个倍增周期后，稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定，根据一级质谱图中两个同位素型肽段的面积比较进行相对定量，属于体内代谢标记法。
技术特点
高效性：SILAC是体内标记技术，标记效率可高达100%；
定量精确，线性范围广，降低由于样品制备、实验操作和仪器设备造成的实验误差，定量重复性好；
体内代谢标记与SDS-PAGE或色谱分离技术相结合，兼容疏水性蛋白和偏碱性蛋白，不受蛋白性质限制；
由于该技术属于体内标记，标记效果稳定，其标记效率不受裂解液的影响，不仅适合于进行全细胞蛋白的分析，还适合于膜蛋白的鉴定和定量；
与化学标记相比，SILAC方法蛋白需要量明显减少，通常每个样品只需要几十微克的蛋白量；
活体标记，更接近样品真实状态；
相容性：可以对多种在DMEM或RPMI 1640培养基中能够培养的细胞或细菌中表达的蛋白进行标记。
适用范围
只适用于活体培养的细胞，对于生物医学研究中常用的组织样品、体液样品等无法分析。
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