EMax Plus 微孔板读板机应用-Molecular Devices
介绍
随着光吸收法可以满足越来越多的应用检测领域，终点法读板机在实验室中的占有率也越来越高。例如ELISAs方法进行细胞因子定量和Bradford法进行蛋白定量。本篇应用就是要着重比较使用Bradford法进行蛋白定量检测时，Molecular
Devices公司最新的产品EMax®
Plus微孔板读板机和VMax微孔板读板机的性能。此外，我们比较了EmaxPlus微孔板读板机和Emax终点法微孔板读板机，利用双抗夹心ELISA方法来定量小鼠/大鼠IL-22细胞因子时表现上的差异。
Bradford 实验
Bradford蛋白定量检测法是一种基于酸性染料与蛋白结合的光吸收实验1。当考马斯亮蓝染料与蛋白质结合后，其光吸收最大检测波峰是从460nm转移至595nm2。可以通过拟合标准曲线得出未知样本的浓度。
使用伯乐公司的Bradford蛋白定量检测试剂盒。以牛血清白蛋白标品来制作一条标准曲线，加入96孔板中且每个浓度下有三个复孔。将考马斯亮蓝G-250染料按1:4稀释后加入到蛋白样本中。孵育30分钟后，分别在EMax Plus和VMax两台读板机上检测585nm波长下的吸光度。最后，应用SoftMax® Pro软件扣除背景后并生成一条标准曲线(图1)。通过比较发现两台读板机上得出的R2结果都是0.98。曲线的线性部分也和试剂盒中对标准曲线的描述相同。
图 1. 使用伯乐公司的Bradford蛋白定量检测试剂盒中的牛血清白蛋白标准品制备一条标准曲线。 两台仪器获得的结果比较几乎相同。 实验结果线性区间可达5个稀释度，且R2结果均为0.98。
ELISA实验
白介素22是一种和炎症相关的细胞因子。它是白介素10细胞因子超家族和干扰素3家族的一员，在介导炎症反应和组织修复过程中起到重要的作用。IL-22可表达在多种细胞中，如gut，skin，NK细胞and CD4+Th1细胞4。
使用R&D公司小鼠/大鼠IL-22双抗夹心法E L I S A 检测试剂盒进行定量，比较EMax Plus和EMax两台读板机的检测结果。首先，将一种能特异性结合小鼠/大鼠IL-22的多克隆抗体预先包被在一块96孔板中。然后，使用移液器向微孔板中加入标准品、质控和空白对照进行孵育，推荐使用Molecular Devices公司的最新洗板机MultiWash.+进行洗板。随后，包被有多抗的微孔板中加入小鼠/大鼠IL-22细胞因子进行孵育后再洗板。最后，短暂孵育后加入底物终止反应并在EMax Plus和EMax两台读板机上进行读数。颜色深浅与孵育时结合的小鼠／大鼠IL-22量成正比。应用SoftMax Pro软件计算后生成标准曲线(图2)。两条标准曲线的R2值也很接近。
图2. 使用R&D公司的小鼠/大鼠IL-22 ELISA定量检测试剂盒，比较EMax Plus和EMax两台读板机在光吸法检测结果上的差异。标准曲线的制备及双抗夹心ELISA实验过程都使用了MultiWash+洗板机单列清洗模式。发现在两台读板机上的ELISA检测结果，即两条标准曲线几乎相同。
关于MultiWash+洗板机
MultiWash+是一台全自动洗板机，兼容96孔和384孔板。并且标配有四个洗液瓶或冲洗瓶，外加一个废液瓶，实现清洗的最大灵活性。仪器上配有触摸屏并且预存20种不同的清洗模式，每种模式下均可灵活的设置8个循环步骤。另外，仪器还可调节洗液流速和体积，调节吸液的速度和时间及浸泡时间。同时，洗头通过在每个孔中交叉吸液方式提高清洗效率，降低每孔中的残液量，并提供三种震荡方式方便用户混匀洗液。仪器占地面积小，无需额外的真空和压力装置，内置泵的设计为您提供一个安静的操作环境。
