Celigo成像分析技术在细胞增殖中的应用
细胞增殖是肿瘤研究的必备实验之一。最简单直接的检测细胞增殖的方法就是在不同时间点进行细胞计数，但是在96孔板甚至384孔板的实验设置下，这无疑是难以操作的。于是，研究者们更倾向于用间接方法研究细胞增殖，比如基于线粒体内脱氢酶还原能力的MTT,
MTS, CCK-8法，还有基于胞内ATP水平的CellTiter-Glo,
ATPlite等。原理上，这些方法都是以细胞的代谢水平来代表细胞数量。但是大家有没有怀疑过这些间接方法真能准确反映细胞的生长状态吗？
美国Genentech公司的科学家对这一问题进行了深入的研究。在2013年发表的一篇文献中，作者选择了两种最常见的检测细胞增殖的方法 – MTS和 CellTiter-Glo和直接细胞计数法进行比较，得到了意想不到的结果。
如上图所示，HT29细胞被6种不同药物处理48小时后用不同方法对细胞增殖进行了分析。从生长曲线来看，这三种方法得到的结果之间有不小的差异。比如Etoposide（ 细胞周期特异性的抗肿瘤药），虽然最高与最低剂量得到的杀伤效率分别相同，但细胞计数与另两种方法的曲线趋势完全不同，所得IC50也小得多。又比如Gemcitabine（DNA合成抑制剂）,
细胞计数所测得的最高剂量杀伤效率比另两种方法测得的要高得多。总体来说，与细胞计数相比较时，MTS和CellTiter-Glo会不同程度地低估药物杀伤效率。
那造成这些差异的原因是什么呢？在文章的开头我们提到了，MTS和CellTiter-Glo都是基于细胞代谢水平的检测方法。这就出现了一个bug:
如果一种药物直接对细胞代谢有影响，会有什么样的结果呢？作者随后进行了一系列深入研究，得出结论：当药物造成细胞周期阻滞时，反映细胞代谢水平的信号与细胞数之间不再成线性关系。此时细胞内的ATP和脱氢酶水平均会显著上升，导致MTS和CellTiter-Glo得到更高的信号值，从而高估细胞数量。
谜题解开了，不过也给小伙伴们带来了一个烦恼：今后如何再愉快地做细胞增殖实验呢？手动数细胞实在太痛苦了。
美国Nexcelom公司的一款名为Celigo的神器了解一下：
无标记细胞增殖只用到了Celigo的明场通道，也仅仅是该神器众多应用中最基本的一个。除了明场，Celigo还配置有4个荧光通道（蓝、绿、红和远红），为实验的设计提供了无限可能。
目前Nexcelom已开发出在细胞健康、肿瘤免疫、病毒学、细胞株构建、干细胞、3D肿瘤球检测等领域的数十种Celigo应用。感兴趣的小伙伴们可以和我们联系哦！
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邮箱：info@nexcelom.com.cn
