Celigo成像分析技术在细胞杀伤中的应用（二）
这么好的方法当然需要一个强大的检测仪器来支撑 – Celigo成像细胞定量分析仪：
● 明场+四色荧光
● 全孔成像，图片清晰，适用于6-1536孔板
● 定量分析全孔细胞数目
● 软件自带流式设门分析功能
● 高速同步成像和分析，15分钟内完成一块96孔板的免疫杀伤检测
现在小编就以NK细胞的ADCC（抗体依赖细胞介导的细胞杀伤）为例子来展示用Celigo做免疫细胞杀伤的效果：
• 全孔成像，分析孔内每一个细胞
• 避免细胞分布不均带来的局部视野误差
• 多时间点检测时，避免因细胞迁移而造成的局部视野前后不一致
• 绿色荧光通道展示被Calcein AM标记的靶细胞
• Celigo软件将细胞圈定，便于用户查看细胞识别是否准确
• 在不同时间点将板放入Celigo进行检测
• 随着时间的推进，绿色荧光细胞（即活的靶细胞）的数量逐渐减少
*每孔下方数字为0小时绿色荧光细胞密度
• Celigo软件自动生成每孔绿色银光细胞随时间变化的曲线，各孔杀伤情况一目了然
• 原始数据可导出为Excel或GraphPad格式进行后续分析
t0为0小时；t为检测时间点；treated为加抗体组；control为未加抗体组
• 如上计算公式即可算出每孔的细胞裂解率
• 每孔数据都由该孔0小时和检测时间点的荧光细胞数相比较得出，不需额外设置对照组，避免了不同孔间铺板密度的差异造成的误差
• 根据数据绘制出细胞裂解曲线
• 将明场和绿色荧光图片叠加，可观察NK细胞和肿瘤细胞间的相互作用
• 在一定抗体浓度下，随着时间的推进，NK细胞逐渐在肿瘤细胞周围聚集，时间越久聚团越明显，活的肿瘤细胞也越少
• 在相同时间点，随着抗体浓度的增高，NK细胞逐渐在肿瘤细胞周围聚集，浓度越高聚团越明显，活的肿瘤细胞也越少
有了这样的图片，你是不是会底气十足地在组会上汇报：肿瘤细胞真的被免疫细胞杀得片甲不留，此乃我亲眼所见！
除了NK细胞, Calcein AM染色法也能运用在PBMC、CIK、中性粒细胞、CAR-T等其他免疫细胞的杀伤。不过呢，Calcein
AM也有一个小小缺点，那就是它的荧光半衰期太短，所以该方法只适用于时程较短（<
6小时）的杀伤实验。如果你的杀伤实验时程较长也不用担心，Nexcelom的科学家们早已开发出其他方法来应对各种各样的实验条件，需要了解的可以给小编留言噢，我们也会在今后的文章中作详细介绍，敬请期待！
参考文献
【1】Somanchi S S, McCulley K J, Somanchi A, et al. A novel method for
assessment of natural killer cell cytotoxicity using image cytometry[J].
PLoS One, 2015, 10(10): e0141074.
