Celigo成像分析技术在细胞杀伤中的应用（一）
2018年的诺贝尔生理学或医学奖授予了两位免疫学家，分别是美国的James P Allison和日本的本庶佑教授，以表彰他们的原创发现推动了免疫学研究的进程，促使了癌症治疗领域革命性新药物的面世。
如今炙手可热的PD-1， CAR-T，TCR-T技术等都要归功于这一伟大发现及其临床应用。如果你的工作也和免疫疗法相关，是不是像小编一样也有一丢丢自豪，感觉自己参与见证了人类疾病史上的一次飞跃呢？
鸡血打满了，该好好干活了！
无论名字多么fancy的疗法，有没有用还是得看它能否消灭肿瘤细胞。在体外实验中，抗体或经改造的免疫细胞（效应细胞）对肿瘤细胞（靶细胞）的杀伤是评估疗法效价的不可缺少的评判标准之一。多年来，科学家们已开发出了多种免疫细胞杀伤的检测方法，小编总结如下：
这些方法原理不同，也各有利弊。比如许多实验室常用的乳酸脱氢酶 (LDH)
释放法是通过检测细胞裂解后释放到培养基中的LDH来反映细胞的杀伤程度的。然而免疫细胞和肿瘤细胞中都含有LDH，死亡后都会释放到培养基中，因此酶标仪的读数无法特异性地区分出肿瘤细胞的死亡，结果容易受到死亡的免疫细胞的影响。另外，该方法需设置多组对照，如无释放组（不加免疫细胞）和最大释放组（加Triton
X-100完全裂解）来确定最低和最高的OD值读数。如果对照组和实验组的细胞铺板密度不均匀，极易造成误差，甚至出现实验组杀伤效率为负数的奇怪结果。
再比如Luciferase报告基因法，是将Luciferase的基因片段连接在与T细胞激活相关基因 (比如IL-2或NFAT)
的启动子之后，通过Luciferase的表达来反映T细胞的激活程度。简言之是在分子水平检测T细胞的激活。做该实验需自行改造T细胞或购买改造好的T细胞系，不够灵活，具有较大的局限性。
列表中的所有方法还有一个共同缺憾，就是看不到细胞。有图才有有真相，细胞杀伤连个细胞的影子都没有，光让咱们相信这些数字，心里是不是有点虚？实验失败了也很难找原因。另外每次实验只能测一个时间点，想测多个时间点得铺多块板，想想就好累！
检测免疫细胞杀伤有没有既靠谱又简单的方法呢？谁说没有呢？科技的发展日新月异，小编今天就给大家介绍一下做免疫细胞杀伤的最新方法：
Calcein AM染色法
• Calcein AM是一种可以渗透细胞膜的染料，通常用来检测真核细胞的存活率
• 在活细胞中，本来不发荧光的Calcein AM被胞内酯酶水解后转化为成发绿色荧光的Calcein
• 在细胞杀伤实验中，用 Calcein AM标记靶细胞，发出绿色荧光；效应细胞不染色以示区别。当靶细胞裂解后，由于胞内的Calcein释放到培养基中，细胞失去荧光。通过计算绿色荧光细胞的数量即可得到活靶细胞数和细胞杀伤效率。
*详细原理可查阅我司Nexcelom Bioscience和德克萨斯大学MD Anderson癌症研究院合作发表的文献【1】。
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项目成果
