杆状病毒滴度检测
实验概要
本实验介绍了检测病毒滴度的方法。
实验原理
根据噬菌斑数计算病毒滴度。
主要试剂
1. 4% agarose gel：2g agrose 50ml 水，高压灭菌
2. 2×Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（invitrogen） 0.07gNaHCO3 H2O，调PH6.1，定容至100ml，无菌过滤
3. supplemented Grace：1×Grace添加3.33mg/ml Lactalbumin，3.33mg/ml yeastolate，无菌过滤
4. 高温灭活FBS
主要设备
1. 6孔板
2. 12ml离心管
3. 100ml无菌玻璃瓶
4. 无菌吸管
5. 70℃水浴锅
实验材料
杆状病毒， SF9：5×105cells/ml
实验步骤
1. 无菌条件下，2ml/孔细胞（5×105cells/ml）种入6孔板，室温孵育1h使其贴壁，孵育后镜检其贴壁程度；
2. 将4% agarose gel放入70℃水浴锅融解，空100ml无菌瓶与2×Grace放入40℃水浴锅预热；
3. 将杆状病毒用无血清supplemented Grace梯度稀释：10-1~10-8。
4. 弃6孔板内上清，快速加入稀释好的病毒，1ml/孔，复孔，室温孵育1h。
5. 配置上层琼脂：加20ml高温灭活FBS到2×Grace 100ml，25ml 2×Grace（含FBS） 12.5ml 无菌水 12.5ml 4% agarose gel，至预热的100ml无菌瓶，轻轻混匀，放入37℃水浴锅备用；
6. 弃6孔板内上清，快速加2ml上层琼脂，以防菌层干燥，静置10-20min使其凝固；
7. 将6孔板放入27℃培养箱，培养4－10天；
8. 计数板中噬菌斑，直至连续两天无变化，加1mg/ml中性红0.5ml，室温孵育2h后计数噬菌斑。
注：
病毒滴度（pfu/ml）=1/稀释倍数×噬菌斑数×1/每孔接种体积
附 件 (共1个附件,占52KB)
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