斑马鱼20-羟化二十碳四烯酸（20-HETE）酶联说明
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)水平。用纯化的斑马鱼20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)，再与HRP标记的20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中斑马鱼20-羟化二十碳四烯酸(20-HETE)浓度。
试剂盒组成
1
30倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
7
终止液
6ml×1瓶
2
酶标试剂
6ml×1瓶
8
标准品（8.0ng/ml）
0.5ml×1瓶
3
酶标包被板
12孔×8条
9
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
4
样品稀释液
6ml×1瓶
10
说明书
1份
5
显色剂A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2张
6
显色剂B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
4.0ng/ml
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
2.0ng/ml
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
1.0ng/ml
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
0.5ng/ml
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
0.25ng/ml
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
