过氧化物酶的测定实验——供体：ABTS
供体：氢过氧化物 氧化还原酶
供体 + H2O2 → 氧化型供体 + 2 H2O
从山葵中提取的这种酶是一种相对分子质量为 44000 的糖蛋白。它与过氧化氢酶关系密切，也携带一个原铁血红素作为辅酶。它对受体（H2O2）具有专一性，但是与众多的底物供体反应，这些特点都可以用在酶的实验中，如 5-氨基 2，3-羟基-1，4-邻苯二胺（发光氨）、3-氨基-9-乙基咔唑（AEC）、5-氨基水杨酸（5AS）、ABTS、4-氯-1-萘酚（4CIN）、3，3'-二氨基联苯氨（DAB）、愈创木酚、邻苯二氨（OPD）、抗坏血酸、间苯二酚、连苯三酚、3，3'，5，5'-四甲基对二氨基联苯（TMB）。过氧化物酶应用在各种共价连接中，例如与 Western 印迹和酶联免疫测定（ELISA）中的抗体或细胞生物学中的胶状金（Basbaum，1989）。
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 实验所需「试剂」具体见「其他」
25℃ 时，在 414 nm 处，ε414＝24.6×103 l/（mmol· mm）。必须注意，1 mol H2O2 形成 2 mol 氧化的 ABTS（Szutowicz 等，1984）。 展开 |
| 注意事项 | |
| 其他 | 试剂： 0.1 mol/L 磷酸钾 pH 6.0 0.02 mol/L 2，2'-连氮-双-（3-乙基苯二氢噻唑-6-磺酸），（ABTS，二铵盐，Mr=548.7；1.1 g 溶于 0.1 mol/L磷酸钾 pH 6.0）。 H2O2 溶液（约 10 mmol/L）：0.06 ml 30％ H2O2 稀释于 50 ml 0.1 mol/L 磷酸钾 pH 7.0，在 240 nm 处以缓冲液为对照的吸收值约为 0.50。 展开 |
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