辣根过氧化物酶实验的HRP的活力测定
1、活力测定：测定k4值的方法操作如下：
取2个比色池（带盖，光程1厘米），按下表加入反应物
*酶液：将1毫克蛋白/毫升的酶液用磷酸盐缓冲液稀释10倍后应用。
加好反应物，摇匀，在470nm 读出OD值，为t=0 的读数。立即加0.01毫升40mM过氧化氢溶液于2个比色池中，即刻摇匀并记时，每隔30秒钟读数一次，约5分钟。并记下实验时的室温。
将所测样品的OD值减去相应时间对照的OD值，然后以OD值为纵坐标，时间为横坐标作图。得一直线，计算出平均每分钟光密度的增加值，即求出△x/△t，按公式⑻求出k4值。实际的实验值k4 = 2.2×10，k4 = 3.1×10，而k4 应当为3.3×10。该方法用于测定粗的无细胞提取液误差较大。
因为某些物质可干扰四邻甲氧基连酚的形成。
或不求k4值，而把在上述条件下，每分钟OD470增加0.001所需酶量定为1个HRP活力单位。
2、蛋白质含量的测定：
将酶液适当稀释后，用 Folin一酚试剂法比色测定蛋白质含量。
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