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T4多核苷酸激酶末端标记

2019.5.18

T4标记的5’末端

1.无菌的1.5ml为了离心管置冰浴上顺序混合下列组分:

50 pmol合成的寡核苷酸

2.5μl 10×反应缓冲液

10μγ-[32P]ATP33pmol

1.5μl T4多核苷酸激酶(15U

灭菌双蒸水加至25μl

2.37℃温育30min

3.当反应物正温育时,以2000×g离心2min制备Sephadex G-25自旋柱。

4.加入2μl 0.5mol/L EDTA或加热至68 10min终止反应。将反应混合物装至自旋柱并于2000×g离心4min1μl柱洗脱液用液闪计数仪计数。


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