T4多核苷酸激酶末端标记
用T4标记的5’末端
1.无菌的1.5ml为了离心管置冰浴上顺序混合下列组分:
50 pmol合成的寡核苷酸
2.5μl 10×反应缓冲液
10μl γ-[32P]ATP(33pmol)
1.5μl T4多核苷酸激酶(15U)
灭菌双蒸水加至25μl
2.37℃温育30min。
3.当反应物正温育时,以2000×g离心2min制备Sephadex G-25自旋柱。
4.加入2μl 0.5mol/L EDTA或加热至68℃ 10min终止反应。将反应混合物装至自旋柱并于2000×g离心4min。1μl柱洗脱液用液闪计数仪计数。
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