免疫球蛋白纯化技术
盐析法纯化免疫球蛋白
DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化免疫球蛋白
Sepharose CL-4B亲和柱层析纯化IgG及IgG亚类
高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体
单克隆抗体亲和层析柱纯化重组人α2a干扰素（rHuIFN-α2a）
| 实验方法原理 | 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 |
|---|---|
| 实验材料 | 血清 |
| 试剂、试剂盒 | 生理盐水 硫酸铵溶液 萘氏试剂 磷酸盐缓冲盐液 磺基水杨酸 |
| 仪器、耗材 | 冰箱 离心机 搅拌器 紫外分光光度计 扭力天平 粗天平 透析袋 尼龙绳 竹棒、PH试纸 镊子 剪刀 烧杯 量筒 吸管 滴管 灭菌小瓶 试管 |
| 实验步骤 |
1. 取正常人混合血清加等量生理盐水，于搅拌下逐滴加入与稀释血清等量的饱和硫酸铵[终浓度为50 ％饱和（NH4）2SO4]，4 ℃，3 小时以上，使其充分沉淀 2. 离心（3000 rpm）， 20 分钟，弃上清，以生理盐水溶解沉淀至X ml。再逐滴加饱和硫酸铵X/2 ml，置4 ℃，3 小时以上［此时（NH4）2SO4的饱和度为33 ％)］ 注：式中1.45与0.74为常数，nm为波长。
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| 注意事项 |
一、影响盐析的因素 1. 蛋白质的浓度 2. 离子强度 3. 盐的性质 4. PH值 6. 蛋白质沉淀后宜在4 ℃放3 小时以上或过夜，以形成较大沉淀而易于分离。
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