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儿童呼吸道感染常见病毒检测的操作方法

2023.4.04

  1.使用前,将所有试剂平衡至室温,载玻片平衡至室温再打开。

  2.样本的稀释:按1:1比例稀释血清样本,即25μl血清加入25μlPBS(磷酸盐缓冲液)中。阴阳性对照不需要稀释。

  3. 用吸附剂处理稀释后的血清:将30μl稀释后的血清加入150μl吸附剂中,彻底混匀。阴阳性对照不需吸附剂处理。处理后的血清要离心10~15分钟除去沉淀,以防干扰检测。

  4. 在载玻片的每孔中加15μl吸附剂处理过的血清。在一个载玻片的每孔中加入15μl不稀释的阳性对照,在另一个载玻片的每孔中加入15μl不稀释的阴性对照。

  5. 将载玻片放入湿盒中,37℃温育90分钟。

  6. 用PBS洗液的缓慢水流冲洗载玻片(避免直接冲入孔内)后,浸泡在PBS中并放置在水平摇床上轻轻摇动10分钟。将载玻片用蒸馏水缓慢水流冲洗(避免直接冲入孔内)。

  7. 载玻片自然晾干。

  8. 每孔加入15μl FITC结合物溶液(不需稀释)。

  9. 将载玻片放入湿盒,37℃温育30分钟。

  10. 重复7和8的洗涤步骤。

  11. 加几小滴封闭介质,小心盖上盖玻片。

  12. 尽快用荧光显微镜在400倍放大率下观察结果。如果不能立即观察,可将其避光放置于 2℃~8℃,不超过24小时。

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