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醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质（一）
关键词：浊度标准物质 食品检测 农药多残留分析 环境监测标准样品醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质（一）
【实验原理】
血清中各种蛋白质的等电点(pI)大都低于8．6，在pH 8．6的缓冲液中，电离成负离子，在电场中向正极移动。因各种蛋白质pI不同，在同一pH下带电荷量有差异，同时各蛋白质的分子大小与分子形状也不相同，因此在同一电场中泳动速度也不同。带电荷多，分子量小者，泳动较快；反之则较慢。
醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白分离为5条区带，从正极端起依次为白蛋白、α1-球 蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白及γ-球蛋白。由于染色时染料与蛋白质的结合与蛋白质的量成正比，因此将各蛋白区带剪下，经脱色、比色或经透明处理后直接用光密度计扫描，即可计算出血清各蛋白组分的相对百分数。如同时测定出血清总蛋白浓度，还可计算出各蛋白组分的绝对浓度。
【试剂与器材】
1．巴比妥缓冲液(pH 8．6，离子强度0．06)称取巴比妥钠12．36g、巴比妥2．21g，于500mL蒸馏水中加热溶解，冷却至室温后，用蒸馏水定容至1L。
2．染色液
(1)丽春红S染色液：称取丽春红S 0．4g、三氯醋酸6g，溶于蒸馏水中并定容至100mL。
(2)氨基黑10B染色液：①第一种配方(推荐配方)：称取氨基黑10B 0．1g，溶于20mL无水乙醇中，加冰醋酸5mL，甘油0．5mL；另取磺柳酸2．5g溶于少量蒸馏水中，加入前液，混和摇匀，再以蒸馏水补足至100mL。②第二种配方：称取氨基黑10B 0．5g溶解于50mL甲醇中，加入冰醋酸10mL和蒸馏水40mL，混合即成。
3．漂洗液
(1)3％(V/V)醋酸溶液，适用于丽春红S染色的漂洗。
(2)甲醇45mL，冰醋酸5mL，蒸馏水50mL，混匀。适用于氨基黑10B染色的漂洗。
4．透明液
(1)液体石蜡或氢萘的润湿透明法，均十分方便。
(2)冰醋酸：95％乙醇=2．7：7．5的混合液。
(3)N-甲基-2-吡咯烷酮．柠檬酸(3．03mol/L N-甲基-2-吡咯烷酮，0．15mol/L柠檬酸)：称取柠檬酸15g溶于150mL水中，加入N-甲基-2-吡咯烷酮150mL，混匀，加蒸馏水至500mL。
5．洗脱液
(1)0．1mol/L NaOH溶液，适用于丽春红S染色的洗脱。
(2)0．4mo1/L NaOH溶液，适用于氨基黑10B染色的洗脱。
6．电泳仪 电子管或晶体管整流的直流电源，电压0~600V，电流0~300mA。
7．电泳槽 铂(白金)丝电极的水平电泳槽。
8．加样器 血红蛋白管和0．2cm×1．5cm有机玻璃片或X线胶片或特制电泳加样器。
9．染色皿、漂洗皿、镊子。
10．光密度计、721分光光度计。
11．醋酸纤维素薄膜 规格2cm×8cm(比色法)，6cm×8cm(扫描法)。
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