血细胞分析仪测定网织红细胞的应用
网织红细胞(网红)计数值是反映骨髓红系造血活力的参数，目前国内实验室最常用的是使用煌焦油蓝染色法，显微镜人工计数网织红细胞。这种方法由于手工操作，人为影响因素较多，重复性差。我们应用美国COULTER MAXM五分类全自动血细胞分析仪测定网红，与人工镜检法进行了比较，报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料：COULTER MAXM全自动血细胞分析仪系美国COULTER公司生产。网红测定试剂盒：美国COULTER公司生产，批号109150，由试剂A与试剂B组成，其主要成份分别是0.06%新亚甲基蓝与0.15%硫酸。网红质控物：美国COULTER公司生产，批号539500。煌焦油蓝染色液。
1.2 全自动血细胞分析仪测定方法：
1.2.1 测定原理：新亚甲基蓝着染红细胞内RNA，酸性试剂使红细胞内血红蛋白渗出成为“影细胞”减少测试的干扰。处理的血液在仪器上通过VCS(电导、射频、激光)的原理进行网红的检测，可提供网红绝对值(＃）、网红百分比(%)、网红平均体积(MRI)、网红成熟指数(MI)和一项彩色立体分布图。
1.2.2 样品采集：静脉采血并用EDTA-K2抗凝(每ml血液用1.4～1.6mgEDTA-K2)，样品均在4h内处理。
1.2.3 操作步骤：严格按说明书进行。
1.3 显微镜计数法：按照卫生部的《全国临床检验操作规程》执行。
2 结果
2.1 精密度比较：
2.1.1 批内精密度试验：取新鲜抗凝样品8份，其网红水平各不同，每份样品测定10次，平均CV为6.8%，结果见表1。
表1 批内精密度试验(n＝10)
标本 X-％ 范围% s CV(%)
1 0.31 0.21～0.40 0.03 9.7
2 0.50 0.41～0.60 0.04 8.0
3 1.23 1.11～1.35 0.12 9.8
4 2.66 2.50～2.84 0.15 5.6
5 4.72 4.51～4.93 0.16 3.4
6 6.76 6.30～7.20 0.58 8.6
7 10.42 9.91～10.98 0.63 6.0
8 21.47 20.76～22.20 0.71 3.3
平均(CV) 6.8
2.1.2 批间精密度试验：每天测定3种水平浓度的网红质控物，连续10天，平均CV为9.39%，结果见表2。
表2 批间精密度试验((n＝10)
质控物 定值% X-％ S CV(%)
水平Ⅰ 0.90 0.95 0.14 14.74
水平Ⅱ 2.60 2.55 0.24 9.41
水平Ⅲ 10.00 10.20 0.41 4.02
平均(CV) 9.39
2.2 携带污染率：取高值样品1份，重复测定3次，随即取低值样品1份，重复测定3次，计算出携带污染率。携带污染率＝（L1－L3）／（H3－L3）×100％，其中的L1、L3分别为第1次和第3次低值样品的测定结果，两者相差取绝对值，H3为第三次高值样品的测定结果［1］。本仪器测定网红时的携带污染率为0.67%(其中L1＝2.60％，L3＝2.55％，H3＝10.00％），小于1%，符合要求。
2.3 血样品测定结果比较：
2.3.1 病人样品测定：任意选取50份门诊及住院病人样品，在用血细胞分析仪测定网红计数的同时，行显微镜人工计数，每份样品推取两张血片，用煌焦油蓝染色液进行染色，由两名有经验的检验人员分别计数1000个红细胞中的网红，取均值与血细胞分析仪法结果比较。结果：人工方法(1.68±0.41)%，血细胞分析仪法(1.86±0.41)%，t检验t＝1.914，P＞0.05。从结果可看出，两种分析方法结果比较差异无显著性意义，相关性好(r＝0.98)。
2.3.2 参考值范围：我们对70名RBC、HGB、MCV、RDW和血沉等血液指标检查正常的体检者(男性40名，女性30名，年龄为18～65岁，来自泉州市鲤城区委)，用血细胞分析仪检测网红，结果为(1.60±0.50)%，参考范围是0.60～2.60%。
3 讨论
网红计数在临床上应用非常广泛，不仅用于贫血的诊断，也作为观察骨髓增生状况的一个良好手段。目前网红测定的方法主要有显微镜法、流式细胞仪法(FCM法)、自动网红计数仪法、全自动血细胞分析仪法，这些方法各有其优缺点［2］。目前国内多采用显微镜法，操作费工费时，受主观因素影响，计数精确性差。所以，实验室需有一个快速、精密、敏感性高的计数方法。
流式细胞仪(FCM)的问世，开创了生物细胞研究的新领域，也为网红测定提供了快速、准确的实验手段，这方面报道的文献很多［2，3］。全自动网红计数仪的临床应用价值也被公认，但由于其仅能测试网红，从而影响了其应用。以上两种方法，由于经济等因素的制约，限制了在常规实验室中的发展。1993年以来，可进行网红计数的血液分析仪相继问世，使血细胞分析仪的应用进入了新的阶段，其代表是COULTER MAXM型全自动血细胞分析仪，它采用VCS技术，不仅能检测有关白细胞、红细胞、血小板等22项测量参数，还可进行网红的测定。VCS技术是利用细胞的体积、高频传导性和激光散射进行测定的三维分析技术。被新亚甲基蓝染色的网红与成熟红细胞、白细胞、血小板区分开，仪器自动测定30秒，有768～32000个细胞被计数分析，保证了结果准确。
前面已述，目前仍在使用的显微镜法精确性较差，文献报道CV为22.2～25.7%［4］。我们的实验结果表明，自动血细胞分析仪法批内平均CV为6.8%(3.3～9.8%)，批间平均CV为9.39%(4.02～14.74%)，与文献报道一致［2］。虽与FCM法CV4.3%(1.7～6.6%)［2］、6.0%(2.9～8.2%)［3］有一定差距，但较显微镜法有较大提高，为临床提供了较为可靠的实验数据。自动血细胞分析仪法与显微镜法具有良好的相关性，r＝0.98，t检验P＞0.05，差异无显著性意义。操作简单，检测速度快，每个样品的测定时间只要1分钟(染色时间除外，分析仪实测30秒)，适合于常规大批样品的检验，消除了人为误差，减轻了工作强度。
综上所述，COULTER MAXM全自动血细胞分析仪测定网红准确性高、精密度好、检测速度快、携带污染率低，尤其适合大批样品的快速测定。同时操作简便，样品用量少，是常规实验室测定网红理想可靠的方法。
