双杂交和其他双成分系统实验（一）
实验材料 载体和酵母菌
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液SDS 凝胶上样缓冲液SDS 聚丙烯酰胺凝胶核酸和寡核苷酸抗体培养基
仪器、耗材 专用设备
实验步骤
第一阶段 诱饵-LexA 融合蛋白的鉴定
材料
缓冲液和溶液
将贮存液稀释到适当浓度。
2XSDS 凝胶上样缓冲液
100 mmol/L Tris-Cl(pH6.8)
200 mmol/L 二硫苏糖醇
4%SDS(电泳级）
0.2% 溴酚蓝
20% 甘油
不含二硫苏糖醇的 SDS 凝胶上样缓冲液可在室溫存放。缓冲液用前在 1mol/L 贮存液中加入二硫苏糖醇。
凝胶
SDS 聚丙烯酰胺凝胶
制备蛋白质分离用的 SDS 聚丙烯酰胺凝胶，请见附录 18。
核酸和寡核苷酸
编码目标蛋白（诱饵）的靶 DNA
抗体
抗 LexA 的单克隆抗体（CLONTECH) 或抗 LexA 的多克隆抗体（Invitrogen) 或抗靶蛋白质融合域的特异性抗体（如果有的话）。
培养基
酵母培养基的成分请见附录 2。
CM 选择性培养基
用表 18-3 估计褥要培养基的量，用表 18-4 制备必需的选择性培养基。
商品销售的无氧基酸的酵母氮源（YNB) 有含硫酸胺和不含硫酸胺两种。表 18-4 假定 YNB 含硫酸胺。如杲盛酵母氮源的瓶子上指示加 1.7 g/L 来配置培养基, 它就不含有硫酸胺，应当在每升培养基中加 5 g 硫酸胺。
酵母选择性 X-gal 培养基
1. 按表 18-4, 以 900 ml 水制备基础培养基。将基本培养基高压灭菌并冷却到 55°C。
2. 在另一个瓶子中，以 100 ml 蒸馏水溶解 7 g 磷酸氢二钠和 3 g 磷酸二氢钠，然后髙压菌。
3. 将两种高压灭菌的溶液混合在一起，并加入 0.8 ml 浓度为 100 mg/ml 的 X-gal(在 N,N-二甲基甲酰胺中), 铺平板。
YPD 培养基
20 g 蛋白胨
10 g 酵母提取物
20 g 葡萄糖
20 g 琼脂（如果用于平板）
加 1L 蒸馏水并高压 20 min。铺板前将高压灭菌的培养基冷却到 55C。
专用设备
干冰/乙醇浴锅
请见步骤 13。
平头牙签，灭菌的
灭菌时，将标准牙签转移到 250 ml 烧杯中，用铝铂纸包盖烧杯，在标准干燥条件下高压灭菌。
预设到 100°C 的加热包或热循环仪，或沸水浴。
附加试剂
本方案第 1 步需要亚克隆试剂，列在第 1 章方案 17。
本方案第 2 步需要酵母转化试剂，列在 Spector 等的文献中（1998, 第 21 章）。
本方案第 17 步需要免疫印迹试剂，列在附录 8。
载体和酵母菌
选择和扩增载体用的酿酒酵母菌（请见表 18-6)
带 LexA(请见表 18-1) 和活化域融合序列（请见表 18-2) 的载体，以及 LacZ 报道子质粒（请见表 18-5)。
