青霉胺的检查方法
酸度取本品,加水制成每1ml中含10mg的溶液,依法测定(通则0631),pH值应为4.0~6.0。青霉胺二硫化物照高效液相色谱法(通则0512)测定。溶剂取乙二胺四醋酸二钠1.0g,加水溶解并稀释制成1000ml,摇匀。供试品溶液取本品约0.125g,精密称定,置100m1量瓶中,加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀。对照品溶液取青霉胺二硫化物对照品适量,精密称定加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含12.5μg的溶液系统适用性溶液取青霉胺对照品与青霉胺二硫化物对照品各适量,加溶剂溶解并稀释制成每1m中含青霉胺1mg和青霉胺二硫化物0.1mg的溶液。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸钠己烷磺酸钠溶液[取磷酸二氢钠6.9g和己烷磺酸钠0.2g加水900ml使溶解,用磷酸溶液(1→10)调节pH值至3.0±0.1,再用水稀释至1000ml,混匀]为流动相;检测波长为210nm;进样体积为20l系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,青霉胺峰和青霉胺二硫化物峰之间的分离度应大于3.0。测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注人液相色谱仪,记录色谱图限度按外标法以峰面积计算,含青霉胺二硫化物不得青霉素照抗生素微生物检定法(通则1201)测定培养基的制备胨6.0g,胰酶消化酪蛋白4.0g,酵母浸出粉3.0g,牛肉浸出粉1.5g,葡萄糖1.0g,琼脂15.0g,水1000ml,调节pH值使灭菌后为6.5~6.7,在115℃灭菌30分钟。试验菌藤黄微球菌照藤黄微球菌[CMCC(B)28001]项下制备菌液。对照品溶液的制备精密称取青霉素对照品适量,加灭菌磷酸盐缓冲液(pH6.0)溶解并定量稀释制成每1m中含0.02单位的溶液。供试品溶液的制备取本品1g,精密称定,置分液漏斗中,加水9ml使溶解,加乙醚10ml与磷酸盐缓冲液(pH2.5)lml,振摇提取1分钟,分取水层至另一分液漏斗中,用乙醚提取2次,每次10ml,合并醚层,加水9ml及磷酸盐缓冲液(pH2.5)1ml,振摇30秒,弃去水层(以上操作应在6~7分钟内完成)。醚层用10ml灭菌磷酸盐缓冲液(pH6.0)提取3分钟,分取水层5ml为供试品溶液(1),剩余水层加0.1m青霉素酶(每1m青霉素酶应大于300万单位)在36~37℃放置1小时作为供试品溶液(2)测定法取双碟不少于4个,每双碟中底层加培养基10ml,菌层加培养基5ml,每双碟安置不锈钢小管6个,分别在对角的两管中滴加对照品溶液、供试品溶液(1)与供试品溶液(2),在29~30℃培养24小时,测量各抑菌圈直径。供试品溶液(1)所致的抑菌圈平均直径不得大于对照品溶液所致抑菌圈的平均直径,供试品溶液(2)不得产生抑菌圈(0.2单位/g)。干燥失重取本品,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥至恒重,减失重量不得过0.5%(通则0831)。
