红细胞脆性的测定
实验概要
学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。
实验原理
正常红细悬浮于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。红细胞膜对低渗溶液的抵抗力越大，红细胞在低渗溶液中越不容易发生溶血，即红细胞渗透脆性越小。将血液滴入不同的低渗溶液中，可检查红细胞膜对于低渗溶液抵抗力的大小。开始出现溶血现象的低渗溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血时的低渗溶液浓度，则为该血液红细胞的最大抵抗力。
生理学上将与血浆渗透压相等的溶液称为等渗溶液；而将能维持红细胞正常形态、大小和悬浮于其中的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液（如1.99%的尿素溶液），但等张溶液一定是等渗溶液。
主要试剂
1%肝素，1%氯化钠溶液，蒸馏水。
主要设备
10 ml小试管，试管架，滴管，1 ml移液管。
实验材料
兔
实验步骤
1.溶液配制：取10个小试管，配制出10种不同浓度的氯化钠低渗溶液（0.25%，0.3%，0.35%，0.4%，0.45%，0.5%，0.55%，0.6%，0.65%，0.9%）。 详见下表：
编 号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
1％NaCl | 1.4 | 1.3 | 1.2 | 1.1 | 1.0 | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.5 |
蒸馏水 | 0.6 | 0.7 | 0.8 | 0.9 | 1.0 | 1.1 | 1.2 | 1.3 | 1.4 | 1.5 |
NaCl ％ | 0.7 | 0.65 | 0.6 | 0.55 | 0.50 | 0.45 | 0.40 | 0.35 | 0.30 | 0.25 |
2.制备抗凝血 不同动物采血方法各有所异,但多采用末梢血.将血滴在有1%肝素的表面皿上,混匀(1%肝素0.1 ml可抗10 ml血)。
3.加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各试管中各加一滴，轻轻摇匀，静置1～2 h。
4.观察结果：根据各管中液体颜色和浑浊度的不同，判断红细胞脆性。
①未发生溶血的试管：液体下层为大量红细胞沉淀，上层为无色透明，表明无红细胞破裂。
②部分红细胞溶血的试管：液体下层为红细胞沉淀，上层出现透明淡红（淡红棕）色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血。
③红细胞全部溶血的试管：液体完全变成透明红色，管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。
注意事项
1. 混匀时，轻轻倾倒1～2次，减少机械震动，避免人为溶血。
2. 抗凝剂最好为肝素，其他抗凝剂可改变溶液的渗透性。
3. 配制不同浓度的NaCl溶液时应力求准确、无误。NaCl溶液的浓度梯度可根据动物的实际情况适当进行调整。
